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產品為蛋白原液形式。每種裝于凍存管中，單抗質量為標示數量 5MG，體積根據其濃度不同略有不同。使用前可以根據自己實驗需求進行稀釋，溶劑建議用去離子無菌水(細胞培養用水)或者 PBS (細胞培養級)。不建議使用含有防腐成分的稀釋液進行稀釋，會增加細胞或者動物毒性。稀釋前，計算加入多少體積溶劑，請參考購買蛋白濃度，或者詢問我司，

舉例，單抗蛋白原液蛋白濃度為 50mg/ml,對應 5MG 包裝的蛋白原液體積為 5mg (質量) /50mg/ml(濃度)=0.1ML，實驗需求蛋白濃度為 10mg/ml, 需要稀釋倍數為 50/10=5, 則需要加入 0.4ML,即 400ul PBS 或者無菌去離子水即可。若給藥量為固定質量值，比如單次給藥 0.5MG，對應蛋白原液給藥體積為 10ul，建議稀釋后，提高給藥體積降低誤差，因為注射器或者移液器吸頭殘留會影響實驗效果。稀釋后的蛋白溶液，可于 2-8 度冷藏避光保存不超過 2 周，不建議長期儲存。

避免反復凍融，每次凍融蛋白活性會降低約 5%左右

生物活性 (僅來自于公開文獻，不保證其有效性)

描述	Cetuximab (anti-EGFR)是一種新型的分子靶向藥物，是 EGFR 的抑制劑，同時也是人源 EGFR 單克隆抗體，與 EGFR 的胞外結合區域相互作用并抑制其受配體刺激。
靶點	EGFR (Cell-free assay) ：0.39 nM(Kd)
體外	Cetuximab (anti-EGFR)是一種重組嵌合的單克隆抗體，與人類 EGFR 受體具有高度親和力。它與 EGFR 結合、抑制其受體相關的激酶的磷酸化合激活，從而導致細胞生長受到抑制、誘導細胞凋亡并減少 VEGF 的產生。Cetuximab 具有顯著的單藥抗腫瘤作用，在高表達 EGFR 蛋白的 NPC 細胞系中與 cisplatin 或 paclitaxel 具有加成作用，但對低表達 EGFR 的 NPC 細胞系 (如 CNE-2 和 C666- 1 )的作用甚微。 Cetuximab 阻止 EGFR 與配體的相互作用，抑制下游 RAS-ERK 激活。它能夠促進內質網應激反應(ER stress) ，促使 ER 蛋白轉運至細胞膜。它競爭性地抑制配體結合，抑制酪氨酸激酶激活，導致受體下調。除了競爭性抑制作用， cetuximab 與 EGFR 結合還可能引起受體內在化和被破壞。
體內	在小鼠移植瘤模型中， Cetuximab 能夠增強幾種化療藥物的抗腫瘤活性。它通過多種機制，包括抑制細胞周期的進展，將細胞周期阻滯在 G1 期、減少 S 期細胞數目來發揮其抗腫瘤作用。 Cetuximab 將細胞阻滯在 G1 期還能引起凋亡，通過誘導和激活相關促凋亡分子。單獨給藥或是與 carboplatin 協同給藥能夠引起腫瘤大小減少、轉移擴散減少、減少細胞表面表達 EGFR、無 BRAF 和 K-ras 突變的 NCI-N87 腫瘤中 MVD。而在源自于 MKN-45 的腫瘤中作用甚微(其腫瘤表型是 BRAF 和 K-ras 行盛行，但胞質內 EGFR 弱表達)。

經典實驗操作(僅來自于文獻，供參考)

細胞實驗

Objective: 細胞活力檢測

Cells: HNE1 和 CNE2 細胞

Concentrations: 62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/ml

Incubation Time: 48 h

Method: 將細胞以 5 × 103 個細胞/孔的密度培養與平底 96 孔板。在 37℃、 5% CO2 的條件下孵育 24 小時后，將 200 μL 用培養基稀釋成不同濃度的 cetuximab (62.5, 125, 250, 500, 1000 或 2000 µg/mL)和/或 cisplatin (0.25, 0.5, 1, 2, 4 或 8 µg/mL)加入每孔。處理 48 小時后，向每孔加入 10 μL CCK-8。孵育 2 小時后，通過檢測 450 nm 處的吸收光值檢測細胞活力。

Objective: To analyze the apoptosis of CRC cells

Cells: human DiFi CRC (Colorectal Cancer) cells

Concentrations: 10 pg/ml

Incubation Time: 72h

Method: To analyze the apoptosis, cells were seeded into 6-well plates (3 × 105 cells per well). After 24 h, cells were cultured both in the absence and presence of drugs. Cell death and apoptosis were assessed by cytofluorimetric analysis using PE-annexin V and 7-aminoactinomycin D (7-AAD) according to the manufacturer's instructions at different time points.

動物實驗

Objective: Cetuximab 在小鼠胃癌模型中的抗腫瘤活性

Animal Models: 人類胃癌的裸鼠模型( CD-1/nu-nu mice )

Formulation: 0.9% NaCl

Dosages: 1 mg/kg

Administration: i.p.

Objective: To investigate the relationship between the EGFR levels and the responsiveness to cetuximab treatment in human cancer xenograft models

Animal Models: Female athymic, nude mice were implanted s.c. with ~1 mm3 tumor fragments

Formulation: PBS

Dosages: 0.25, 0.5 or 1 mg/mouse

Administration: i.p.

注：本產品僅供科研使用！

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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