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8%預制膠,12孔

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  • 產品產地:國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量:1盒(10塊)
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容:8%預制膠,12孔現貨供應,價格實惠。

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標簽:8%預制膠 12孔 1盒(10塊) 

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8%預制膠,12

Precast Protein Gels, 8%, 12 wells

1盒(10塊)

CS-01F99248

本品通過pH中性緩沖液制備,丙烯酰胺與甲叉丙烯酰胺配比是291,其規格為濃縮膠5%,分離膠8%,膠板尺寸10×8cm,凝膠厚度1 mm12孔梳齒,單孔最大上樣量30 µl。電泳及轉膜緩沖液使用傳統的tris-glycine緩沖液,蛋白條帶直且尖銳。本品兼容Biorad,天能及北京六一的mini膠電泳槽及其他任何膠板寬度在10 cm的電泳槽。

N,N-亞甲基雙丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交聯劑的濃度不同從而分離不同大小范圍的蛋白質。與傳統實驗室自行配制凝膠相比,使用預制膠具有以下優點:1)即開即用,不用再配制N種溶液、灌膠、等膠凝固,節省了寶貴的時間和精力;2)不用接觸幾種具有積累性神經毒性的試劑(丙烯酰胺/甲叉丙烯酰胺:神經毒性和遺傳毒性;TEMED:強神經毒;過硫酸銨:可嚴重損傷呼吸道,眼睛,皮膚);3)大規模生產,膠與膠之間重復性好,質量穩定,不像手工灌膠那樣結果差異大。

使用方法

1)剪開包裝取出膠,撕去膠板底端膠紙,將預制膠固定在電泳槽中,加入電泳緩沖液沒過梳齒部位,雙手按住梳子左右部位將其平穩緩慢(一定要慢,否則會將膠齒拔斷或拔歪)拔出,在前后板的上方中央卡上一個“V”型卡(通過加固前后板,不僅可防止槍頭上樣用力過猛撬開兩板產生縫隙,還可穩定跑膠質量,電泳過程中“V”型卡不可取出),上樣后進行電泳,電泳后取出膠板,用鑷子或小螺絲刀沿左右兩板間的縫隙將兩板別開,將膠取出,棄去塑料板。

2)電泳:使用《分子克隆》指定的 tris-glycine電泳緩沖液(tris 25 mM, glycine 250 mM, SDS 0.1%)。推薦使用低壓100V15min換高壓150V跑至電泳結束。
3)轉膜:使用《分子克隆》的 tris-glycine 電轉緩沖液(含 20%甲醇或乙醇),操作與實驗室原有操作完全相同。

實驗步驟:
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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