產品目錄

產品名稱	英文名稱	規格	貨號
人端粒酶活性熒光實時定量PCR法檢測試劑盒	Human Telomerase Activity SYBR Green Real-time qPCR Kit	20T\|50T	CS-01F99246

端粒是真核生物染色體末端特殊的DNA-蛋白結構，含多個重復序列（5'-TTAGGG-3'），端粒結構的形成和功能的維持需要端粒結合蛋白的直接或間接參與。端粒酶是細胞體內一種核糖核蛋白復合體，是由RNA和蛋白質亞基組成的一種特殊的逆轉錄酶，其可以利用自身的RNA模板合成末端DNA，并添加到染色體末端以克服末端序列的丟失，從而使細胞獲得增殖能力。

端粒酶蛋白催化亞基（TERT或TRT）具有反轉錄酶的主要特征，其表達在正常細胞中受到抑制，研究表明，TERT或TRT的表達與端粒酶活性的表達一致，與端粒酶的活化程度密切相關。Wisman等在人卵巢癌中利用逆轉錄PCR檢測hTERT的mRNA的表達，并采用TRAP法檢測端粒酶活性，結果證實二者均存在于惡性腫瘤中并且表達模式相同。基于上述原理，實時熒光定量PCR端粒酶檢測試劑盒通過檢測TERT的mRNA表達水平來間接反應端粒酶的活性。

實時熒光定量PCR（SYBR Green Real-time PCR）方法以其卓越的快速性及定量性被廣泛應用于科研領域，使用本試劑盒可以準確簡便地進行mRNA的表達分析。試劑盒采用SYBR Green qPCR Master Mix為熒光實時定量PCR和Two-Step熒光實時定量PCR設計的最優反應體系，并結合特異性的細胞端粒酶催化亞基基因TERT引物，簡化實驗步驟和提高實驗效率。Master Mix含有Maxima Hot Start Taq DNA聚合酶、dNTPS、進行優化處理的PCR反應緩沖液以及SYBR Green染料。使用Hot Start Taq DNA聚合酶，為PCR反應提供了更高的產量和靈敏度、特異性，能夠檢測低至10個拷貝的目的基因。

本試劑盒適應于大多數的Real-time PCR擴增儀，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州博日（Line-GeneBioer）等品牌的PCR擴增儀。

備注：

建議采用25μL的實驗體系，如果改變請參照其余說明進行調整。

主反應混合液Master mix含有除模板、引物外的全部組分，避免其反復凍融和污染是進行一個成功實時定量PCR反應的重要步驟。

PCR擴增儀設定時需要建立起始10分鐘、95℃的變性程序以激活Maxima Hot Start DNA聚合酶。

一般實時定量實驗中采用適宜體系確保Maxima qPCR Master Mix的最小化，避免產生大量的熒光強度。

針對不同實驗條件和儀器型號重新調整熒光閾值。
當使用Bio-Rad的iCycler iQ或MyiQ system時請按照儀器生產商的說明進行實驗。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關法律、法規，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。

您感興趣的產品*
您的單位*
聯系人*
聯系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*

同類產品

氨基黑10B染色液(0.1%) 氨基黑10B染色液(0.5%) 苯胺黑染色液(0.55%) 硫酸魚精蛋白溶液(1%) 硫酸魚精蛋白溶液(10%) 苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L) 4-香豆酸輔酶A連接酶(4CL)提取液真菌蛋白提取試劑盒(大型真菌) 植物種子蛋白提取試劑盒(2D電泳用)(高淀粉含量樣本用) 植物核蛋白提取試劑盒(蛋白組實驗、質譜適用)-非酶法

訂購流程

訂貨流程

產品訂購說明:

1、報價含普票、運費。

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

賬戶名：上海生物

開戶行：中國銀行山東省分行營業部

賬號：2169 2341 6278

為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個銀行的賬戶，學校、醫院客戶購買產品如因單位財務制度原因可先發貨待報賬后匯款，請及時告知銷售人員已做具體操作。

世俱杯2025赛程_中国足彩网首页官网_埃弗顿vs托特纳姆热刺_中国女排现状 - 奥运女足历届冠军一览表

人端粒酶活性熒光實時定量PCR法檢測試劑盒

產品目錄

聯系我們

技術服務

商品詳情購物流程代測服務付款方式常見問題

在線咨詢

同類產品

訂貨流程

付款方式