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His標簽蛋白純化試劑盒(還原劑和螯合劑耐受型)

  • 產品貨號：CS-01F99231
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：305
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：10ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：His標簽蛋白純化試劑盒(還原劑和螯合劑耐受型)現貨供應，價格實惠。

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標簽:His標簽蛋白純化試劑盒(還原劑和螯合劑耐受型) 10ml 

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His標簽蛋白純化試劑盒(還原劑和螯合劑耐受型)

GoldBalb His-tag Protein Purification Kit

10ml

CS-01F99231

試劑盒是一種采用了新型的GoldBalb His-tag Purification Resin的可以兼容還原劑和螯合劑，并能簡單、快速、高效并且高特異性地純化His標簽蛋白的試劑盒。試劑盒提供了His標簽蛋白所需的相關試劑和親和層析柱空柱管（10套×3mL），為His標簽蛋白的純化帶來了極大的便利。一個包裝的本產品足夠進行10次His標簽重組蛋白純化，每次細菌沉淀的濕重約為1克。每次蛋白的最大純化量為10～15mg，具體的最大純化量和蛋白分子量有關；對于分子量為50kD的帶有His標簽重組蛋白，每次的蛋白最大純化量為3～10mg。在不使用親和層析柱空柱管的情況下，參考本說明書本試劑盒足夠進行500次小量His標簽蛋白純化。

蛋白樣品溶液通過GoldBalb His-tag Purification Resin時，重組蛋白His標簽上的組氨酸殘基能特異性地結合到GoldBalb His-tag Purification Resin中的鎳離子上，其它蛋白則不能被結合。洗滌后，His標簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化。

GoldBalb His-tag Purification Resin對His標簽重組蛋白的親和力強、選擇性高、結合容量大，可以獲得高純度的His標簽重組蛋白，可用于簡單、快速、高效地純化細菌、哺乳動物細胞、昆蟲及桿狀病毒等多種表達系統中表達的His標簽重組蛋白。純化的蛋白可以用于結構和功能研究、抗體制備、蛋白與蛋白相互作用、蛋白與核酸相互作用等方面的研究。

GoldBalb His-tag Purification Resin采用了一種高度交聯的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose CL-6B)為基質，并使用了進一步優化的接臂和鎳離子螯合技術，和目前市售的大多數Ni-NTA agarose或類似產品相比，非特異性蛋白結合顯著降低，耐受壓力強，鎳離子螯合非常穩定。和同類產品相比，本產品由于鎳離子基本不會流失，重復使用本純化介質時不需要重新裝載鎳離子。

Ni-NTA agarose以及絕大多數類似的鎳柱產品不能耐受蛋白樣品中常見濃度的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT)、β-巰基乙醇等以及常見濃度的螯合劑如EDTA等，但GoldBalb His-tag Purification Resin可以很好地耐受DTT等還原劑以及EDTA等螯合劑。本產品可耐受20mMDTT等還原劑，以及20mMEDTA等螯合劑。這為需要添加還原劑或螯合劑的蛋白樣品的純化提供了可能性。本產品不兼容8M尿素和6M鹽酸胍。對于包涵體蛋白的純化，在采用8M尿素或6M鹽酸胍溶解蛋白的情況下，需要通過透析去除尿素和鹽酸胍后才能使用本產品進行His標簽蛋白的純化。
保存條件：4℃保存，至少一年有效。除GoldBalb His-tag Purification Resin外，其余均可以-20℃保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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