產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
高通量96孔板血液基因組提取試劑盒	96wells Blood Genomic DNA Extraction Kit	4×96孔	CS-01F99096

介紹

本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，操作簡單、快速，在短時間內(nèi)即可完成96個不同血液樣品DNA的提取。提取的基因組DNA可供基因檢測或者組織分型、PCR、酶切和Southern雜交等實(shí)驗(yàn)操作。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。200μl-600μl全血樣本可以提取4～20μg的DNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

•快速分離高質(zhì)量的血液基因組。

•不需酚/氯仿有毒有機(jī)試劑。

•完全去除污染物和抑制劑，便于下游應(yīng)用。

•可用于高通量自動化核酸提取工作站。

儲存條件：室溫（15–25℃）干燥條件下可保存1年；更長時間的保存可置于2–8℃。2–8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，應(yīng)在使用前置于37℃下溶解沉淀。

注意事項(xiàng)：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

1．使用前請按照瓶上標(biāo)簽在緩沖液GD和漂洗液PW中加入相應(yīng)體積的無水乙醇。

2．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

3．若緩沖液GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。

4．所有的離心步驟均為室溫下進(jìn)行。

5．洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50μl，體積過小影響回收效率。

6．洗脫液的pH對于洗脫效率有很大影響。若用去ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0–8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
7．使用排槍時應(yīng)注意不要打濕96孔板孔口。離心時，封口膜務(wù)必封蓋嚴(yán)實(shí)，以防離心過程中有液體濺出產(chǎn)生交叉污染。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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