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新型植物基因組DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99061
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：251
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次|200次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：新型植物基因組DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:新型植物基因組DNA提取試劑盒 50次 200次 

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新型植物基因組DNA提取試劑盒

NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit

50次|200次

CS-01F99061

本試劑盒采用高效、專一結合核酸的離心吸附柱和獨特的緩沖系統，適合從各種不同的植物新鮮或凍存組織中提取基因組DNA，并可最大限度地去除植物組織中的雜質。本試劑盒無需使用酚/氯仿抽提，操作安全。提取的基因組DNA片段大、純度高、質量穩定可靠，適用于PCR、熒光定量PCR、分子標記、文庫構建等實驗。

自備試劑：無水乙醇

實驗前準備及重要注意事項：

1、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA片段較小且提取量下降。

2、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer LP3和Buffer GW2中加入無水乙醇。使用前請檢查Buffer LP1和Buffer LP2是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀，請將Buffer LP1和Buffer LP2于56℃水浴重新溶解。

操作步驟：

1、取植物新鮮組織100 mg左右或干重組織約20 mg，加入液氮充分研磨。

2、將研磨后的粉末收集到離心管(自備)中，加入400μl Buffer LP1和6μl RNase A(10 mg/ml)，渦旋振蕩1分鐘，室溫放置10分鐘，使其充分裂解。

注意：

1)使用渦旋振蕩或移液器吹打，充分裂解組織，組織裂解不完全會影響最終的DNA得率。

2)請勿在使用前將Buffer LP1與RNase A混合。

3、加入130μl Buffer LP2，混勻，渦旋震蕩1分鐘。

4、12000rpm(~～13400×g)離心5分鐘，將上清移至新的離心管(自備)中。

5、加入1.5倍體積的Buffer LP3(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，充分混勻(如500μl濾液加入750μl Buffer LP3)。

注意：加入Buffer LP3后應立即混勻，可能會產生沉淀但不影響后續實驗。

6、將上步所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

注意：如吸附膜呈現綠色，向吸附柱中加入500μl無水乙醇，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8、重復步驟7.

9、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR 等)。

10、將吸附柱放到一個新離心管(自備)中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100μl Buffer GE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

注意：

1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)，pH值低于7.0時洗脫效率不高。

2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產量。

3)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟10所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟10；若洗脫體積小于100μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會減少DNA的總產量。如果所得DNA的量小于1μg，推薦用50μl Buffer GE進行洗脫。

4)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。
儲存條件：室溫(15～30℃)。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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