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標簽:酵母基因組DNA提取試劑盒 50次
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產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| 酵母基因組DNA提取試劑盒 | Yeast Genomic DNA Extraction Kit | 50次 | CS-01F99057 |
本試劑盒適用于從酵母樣品中提取高純度的總DNA，本品無需使用苯酚、氯仿等有機溶劑抽提，可獲得最大為50 kb的DNA，同時對100 bp的DNA片段也能有效的回收。本試劑盒采用優化的緩沖液體系使裂解液中的DNA高效結合在硅膠膜上，而其他污染物可流過膜，使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可獲得高純度的DNA。提取的DNA可直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文庫構建、Southern Blot、分子標記等下游實驗。
保存條件：Lyticase -20℃，其他組分室溫(15～30℃)。
自備試劑：無水乙醇，β-巰基乙醇。
| 產品特點 1、適用于從酵母樣品中分離純化高純度總DNA。 2、無需有機溶劑提取以及乙醇沉淀，徹底去除污染物及下游反應抑制物，快速提取高品質DNA。 3、Lyticase酶與玻璃珠共同作用，有效破除酵母細胞壁。 實驗前準備及重要注意事項： 1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置，避免反復凍融，以免影響其活性。 2、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的DNA片段較小且提取量下降。對于有些細胞壁較厚以及在培養階段會產生大量代謝物的酵母，建議在生長早期收集樣品。 3、Lyticase Working Buffer在使用前請加入β-巰基乙醇，使其終濃度為0.1%。 4、第一次使用前應按照試劑瓶標簽說明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇。 5、使用前請檢查Buffer GTL和Buffer GL是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀，請將Buffer GTL和Buffer GL于65℃水浴重新溶解。 6、如果下游實驗對RNA污染比較敏感，可以在加入Buffer GL前加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0225S。 操作步驟： 1、取1-5ml酵母培養物(最多不超過5×107個細胞，一般對于釀酒酵母OD600=1.0時，相當于1-2×107細胞/ml)，12000rpm(～13400×g)離心1分鐘，收集菌體沉淀，盡量吸棄上清。 注意：菌液較多時，可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中。 2、酵母細胞壁的去除：向菌體中加入600μl Lyticase Working Buffer(使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，使其終濃度為0.1%)，并加入5μl Lyticase，充分混勻。30℃處理30分鐘。4000rpm(~1,500×g)離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。 注意：以上為5×107酵母細胞Lyticase用量，根據酵母的菌株和酵母細胞數量的不同，所用的Lyticase的濃度和孵育時間應該進行適當調整。 3、向沉淀中加入200μl Buffer GTL，加入40 mg玻璃珠(Glass Beads)，渦旋5分鐘。 4、加入20μl 蛋白酶K 混勻。55℃振蕩水浴至細胞完全裂解。若無振蕩水浴箱，溫育期間每20-30分鐘顛倒混勻一次。(一般不超過1小時細胞即可完全裂解)。 注意：如需去除RNA，在上述步驟完成后加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液，震蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。 5、12000rpm離心5分鐘，小心吸取上清至新離心管中。 6、加入200μl Buffer GL，充分混勻。70℃孵育10分鐘，其間顛倒混勻數次，12000rpm離心5分鐘，將上清移到一個新的離心管中。 注意：若孵育后溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取DNA量少和提取的DNA不純。 7、加入200μl無水乙醇，充分顛倒混勻，此時可能會出現絮狀沉淀。短暫離心，使管壁和管蓋上的液體集中到管底。 8、將步驟7所得溶液和沉淀全部加入到已裝入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 10、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需進一步提高DNA純度，可重復步驟10。 11、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘以徹底晾干。 12、將吸附柱置于一個新的離心管(自備)中，向吸附柱的中間部位懸空加入50-200μl Buffer GE或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。 注意： 1)如果下游實驗對pH值或EDTA敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)，pH值低于7.0時洗脫效率不高。 2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產量。 3)用另外的50-200μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產量。 4)如果要提高DNA的終濃度，可以將步驟10所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上，重復步驟10；若洗脫體積小于200μl，可以增加DNA的終濃度，但可能會減少總產量。如果DNA的量小于1μg，推薦用50μl Buffer GE或滅菌水洗脫。 5)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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