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游離DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99056
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：241
  • 庫存：100
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：游離DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:游離DNA提取試劑盒 50次 

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游離DNA提取試劑盒

CWhipro Circulating Nucleic Acid Extraction Kit

50次

CS-01F99056

本試劑盒適用于從新鮮或冷凍的血清、血漿、淋巴液、尿液等無細胞體液中提取游離DNA。本試劑盒采用可以特異性結合核酸的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統，樣品裂解后，游離DNA在高鹽條件下與硅膠膜結合，在低鹽、高pH值時游離DNA從硅膠膜上洗脫下來。本品可以處理0.1-1ml的液體樣本，配置的高效微量吸附柱洗脫體積可低至20μl。純化的DNA產量高、質量好，最大限度去除蛋白、色素、脂類及其他抑制性雜質污染，游離DNA得率與樣品的類型，儲存條件、時間以及個體間差異有很大關系。純化得到的游離DNA質量穩定、可靠，可直接用于PCR、熒光定量PCR和二代測序等分子生物學實驗。

保存條件：吸附柱DF置于2～8℃保存1年，其他組分室溫(15～30℃)。

自備試劑：無水乙醇、異丙醇。

產品特點：

1、適用于從新鮮或冷凍的血清、血漿、淋巴液、尿液等無細胞體液中提取游離DNA。

2、可以處理0.1-1ml的液體樣本，配置的高效微量吸附柱洗脫體積可低至20μl。

3、純化得到的游離DNA質量穩定、可靠，可直接用于PCR、熒光定量PCR和二代測序等分子生物學實驗。

實驗前準備及重要注意事項：

1、向蛋白酶K 中加入5ml的蛋白酶K 儲存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置。

2、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取量下降。

3、本試劑盒可以提取0.1-1ml液體樣品。

4、使用前請檢查Buffer CL、Buffer CB是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀，請將Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解。

5、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在Buffer CB中加入異丙醇，混合均勻，并在試劑瓶標簽上做好標記。

6、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇，混合均勻，并在試劑瓶標簽上做好標記。

7、實驗開始前請將水浴鍋預熱至60℃。

8、可將洗脫緩沖液Buffer EBL預熱至60℃后使用。

操作步驟：

1、向離心管(自備)中加入20μl 蛋白酶K 。

2、加入200μl血清/血漿樣本。

注意：當樣品量超過200μl時，請等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB試劑用量，具體試劑加入量可參考附表。

3、加入160μl Buffer CL，顛倒混勻，劇烈震蕩至少30秒。

4、60℃孵育30分鐘，其間顛倒混勻數次。

注意：200μl 血清/血漿樣本60℃孵育10-15分鐘即可。

5、加入360μl Buffer CB(使用前檢查是否加入異丙醇)，震蕩至徹底混勻。

6、冰浴5分鐘，短暫離心，使管壁和壁蓋上的液體集中到管底。

7、將步驟6所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前檢查是否加入無水乙醇), 12000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前檢查是否加入無水乙醇)，12000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

10、向吸附柱中加入750μl 無水乙醇，12000rpm離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

11、12000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶促反應。

12、將吸附柱置于新的離心管中，向吸附柱的中間部位懸空加入20-100μl Buffer EBL或滅菌水，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

注意：

1)如果下游實驗對pH值敏感，可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對洗脫效率有很大影響，若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)，pH值低于7.0時洗脫效率不高。

2)將洗脫緩沖液Buffer EBL預熱至60℃后使用,且離心之前室溫孵育5分鐘，可以增加產量。

3)如果要提高DNA的終濃度，可以將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2-5分鐘，12000rpm離心1分鐘。
4)因為保存在水中的DNA會受到酸性水解作用的影響，如需長期保存，推薦用Buffer EBL洗脫并于-20℃保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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