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細胞/組織基因組DNA快速提取試劑盒(柱式吸附)

  • 產品貨號:CS-01F99044
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度:241
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:
  • 含量:50次|100次|200次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容:細胞/組織基因組DNA快速提取試劑盒(柱式吸附)現貨供應,價格實惠。

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標簽:細胞/組織基因組DNA快速提取試劑盒(柱式吸附) 50次 100次 200次 

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細胞/組織基因組DNA快速提取試劑盒(柱式吸附)

Cells/Tissue genomic DNA rapid extraction kit

50|100|200

CS-01F99044

介紹

 

 本試劑盒適用于快速提取各種動植物細胞/組織基因組DNA,采用獨特的結合液/蛋白酶K迅速裂解細胞和滅活細胞內核酸酶,然后基因組DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜, 再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟, 抑制物去除液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除, 最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈基因組DNA從硅基質膜上洗脫。

試劑盒組份(100次):

裂解液TL——————————20ml

結合液CB——————————20ml

抑制物去除液IR———————50ml

漂洗液WB——————————25ml

洗脫緩沖液EB————————15ml

蛋白酶K粉——————————2×20mg

吸附柱AC——————————100

收集管(2ml)————————100

產品特點:

1.離心吸附柱內硅基質膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產試劑盒膜質量不穩定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。

3.快速,簡捷,單個樣品操作一般可在30分鐘內完成。

4.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達1.71.9,長度可達30kb -50kb,可直接用于PCRSouthern-blot和各種酶切反應。

注意事項:

1. 所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 需要自備1XPBS(磷酸鹽緩沖液),和異丙醇。

3. 實驗前將需要的水浴先預熱到70℃備用。

4. 結合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖

洗。

5. 洗脫液EB 不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫,但應該確保批pH 大于7.5 pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA 應該保存在-20℃。DNA 如果需要長期保存,可以用TE 緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0),但是EDTA 可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。

儲存條件:室溫,有效期12個月。
本制品別名:細胞DNA快速提取試劑盒|組織DNA快速提取試劑盒|細胞DNA提取試劑盒|組織DNA提取試劑盒

實驗步驟:
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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