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本試劑盒適合于從口腔/咽拭子中分離純化基因組DNA。采用特制的進口DNA吸附柱和獨特的緩沖液系統，特別適合于從口腔/咽拭子中分離純化基因組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后DNA在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜（特別配備了Poly Carrier可以從體系中輕松捕獲微量核酸），再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，將鹽、細胞代謝物、蛋白等雜質去除，最后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組DNA從硅基質膜上洗脫。純化后的DNA無雜質和PCR抑制劑，可直接適用于PCR分析。

試劑盒組份(50次)：

裂解液ML————————————20ml

結合液CB————————————20ml

抑制物去除液IR—————————25ml

漂洗液WB————————————15ml

Poly Carrier——————————200μl

洗脫緩沖液EB——————————15ml

蛋白酶K(20mg/ml)————————20mg

吸附柱AC和收集管————————50套

產品特點：

1.不需要使用有毒的苯酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

2.節省時間，簡捷，單個樣品操作一般可在20分鐘內完成。

3.配備了Poly Carrier 用于充分收集特別微量DNA。

4.多次柱漂洗確保高純度，提取的DNA 純度高，質量穩定可靠，可適用于各種常規操作，包括PCR、酶切、測序、Southern 雜交等。

注意事項：

1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到特定溫度備用。

3. 結合液CB 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物，操作時戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4. Poly Carrier：

Poly Carrier 使用方法：如果起始處理量很少（口腔咽拭子上收集到的細胞很少），我們推薦使用Poly Carrier，如果預期有較大量DNA產量，用戶可以根據需要選擇是否加入PolyCarrier。使用時在每個樣品提取所需400μl結合液CB 中加入4μl Poly Carrier，將結合液CB 與Poly Carrier溶液充分顛倒混勻即可(結合液CB容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據樣品數量，在總共需要的結合液CB中加入總共需要的Poly Carrier混勻備用。混合液在室溫24小時內穩定。

儲存條件：室溫，有效期12個月。
本制品別名：咽拭子基因組DNA快速提取試劑盒

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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