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液體樣品DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99028
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：183
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  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：液體樣品DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:液體樣品DNA提取試劑盒 50次 

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液體樣品DNA提取試劑盒

Liquid Sample DNA extraction kit

50次

CS-01F99028

介紹

 

 本試劑盒專門用于從各種液體樣品中提取DNA的試劑盒。可以處理各種液體樣品（血液，血清，血漿，腦脊液，淋巴液,細胞培養上清液等）、單個或少量的細胞，微小胚胎等等。提取的DNA與PCR、熒光PCR、RT-PCR、熒光RT-PCR等后續反應兼容。

試劑盒特點：

1．DNA的回收率高，可以達到90%以上，可以跟進口的同類產品媲美。

2．一管式操作，減少了樣品污染的可能。

3．一站式套裝，除樣品外客戶不需要準備任何試劑，降低了實驗誤差。

4．安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。

5．試劑穩定，可以長期放置。

保存條件：常溫運輸和保存，但溶液A長期放置時（1月以上）最好放4℃。溶液B和溶液C具有揮發性，使用后需要將瓶蓋擰緊。

使用方法：

1．將不超過0.2 mL的液體樣品轉移到自備的1.5 mL旋蓋塑料離心管中。

2．加入0.6 mL溶液A，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。注意:液體樣品DNAout溶液A如果放置在4℃，將會產生沉淀，用前需37℃-65℃水浴融化并充分搖勻后方可使用。

3．室溫靜置10分鐘。

4．加入0.7 mL溶液B，蓋上蓋子后振蕩3-5秒。

5．13,000-15,000g室溫離心15分鐘。強烈建議在離心管管壁上用記號筆做簡單標記以區別離心面和向心面。

6．小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀。

7．加入1.0 mL溶液C，振蕩數秒后13,000-15,000g室溫離心5分鐘。

  注意：將離心管放入離心機時一定要將離心面向外。

8．小心移棄上清。注意不要觸及離心面管底的核酸沉淀。

9．短暫離心數秒。注意：將離心管放入離心機時一定要離心面向外。

10．小心移棄殘留上清（殘留的溶液C會影響后續反應）。此時管壁（離心面方向）上將有可見的膜狀沉淀。

11．加入100μl溶液D，用移液槍仔細吹打離心管管底和管壁的膜狀沉淀，使其溶解。溶解液如果混濁或有少量不溶物是正常現象，不溶沉淀物中就裹含有DNA。
12．直接取適量樣品用于PCR或其他后續實驗，也可保存于-20℃或-80℃。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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