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柱式動物DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99024
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：193
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式動物DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式動物DNA提取試劑盒 50次 

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柱式動物DNA提取試劑盒

Animal DNA column extraction kit

50次

CS-01F99024

本試劑盒是在我司動物DNA提取試劑盒的基礎上改良而得的柱式升級產品，主要用于快速提取新鮮或冷凍的動物組織中的基因組DNA。

產品特點：

1. DNA更加純凈，大多數DNA樣品的OD260/280值在1.8-1.9之間。

2. DNA產率一般在200μg/g左右(跟組織種類密切相關)。

3.可直接用于PCR、酶切、雜交等后續反應。

4. 操作更加簡單，離心吸附操作代替離心沉淀，整個過程室溫操作約10分鐘，適合大規模樣品處理。

5. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

6. 性價比高，質量和國外同類產品相當，但價格更便宜。

儲存條件：常溫運輸和保存、有效期一年。

使用方法：

注意：溶液A容易產生沉淀，溶液B十分粘稠，用前均需要在65℃水浴中加熱使沉淀溶解或粘稠度降低，用前充分搖勻。

1. 根據使用材料的不同進行下列操作：

a)對貼壁細胞：吸盡培養液，在每10平方厘米細胞中加入0.8mL預熱的溶液A，用槍充分吹打以確保細胞全部裂解，然后把裂解液轉移到1.5mL塑料離心管中。

b)對懸浮細胞：離心收集細胞，吸盡液體，在每1-5×106懸浮細胞中加入0.8mL預熱的溶液A，用槍充分吹打以確保細胞全部裂解。然后把裂解液轉移到1.5mL塑料離心管中。如果是fibroblasts或carcinoma細胞，0.8mL溶液A的細胞使用量不要超過1×106個細胞。

c)對新鮮或冷凍的組織：先將剪切成小塊的新鮮組織或冷凍保存的組織放入10mL或15mL塑料離心管中，每50-100mg組織加0.8mL預熱的溶液A，用剪切式勻漿器勻漿30秒左右，然后把裂解液轉移到1.5mL塑料離心管中。對肝、脾、胰、腎等細胞分裂十分旺盛的組織(細胞中含大量正在復制的DNA)，建議組織的使用量不要超過50mg。

d)對DNAhold保存組織：先用紙吸去DNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮或冷凍組織的處理。

2. 加入0.4mL預熱的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘稠，可將1mL槍頭剪掉一截再用，也可以用稱量方法加0.4 g。加入溶液B后需要顛倒數次充分混勻。

3. 65℃水浴5-10分鐘。如果室溫放置，DNA產量將降低10-20%。

4. 加入0.2mL自備氯仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒，此時溶液將呈乳白色。一定要確保離心管底的液體被震蕩起來。

5. 12000～15000g室溫離心2分鐘。上清透明，中間層為白膜(蛋白層)。

6.小心將上清液平均轉移到兩個新的離心管中，避免觸及中間的白膜。

7. 每個管中加入1.5倍體積的溶液C，充分顛倒混勻。

8. 分兩次上柱(即先轉移一半的混合液到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液)。

9. 加0.7mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10. 加0.3mL通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。

11. 12000～15000g室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會污染DNA。

12.室溫放置半分鐘使殘留乙醇揮發。

13. 將離心吸附柱轉移到一新的1.5mL塑料離心管中，加入50-100μL DNA洗脫液2.0，室溫放置離心吸附柱1-2分鐘。
14. 12000～15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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