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柱式凍存血液DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99023
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式凍存血液DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式凍存血液DNA提取試劑盒 50次 

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柱式凍存血液DNA提取試劑盒

Frozen blood DNA column extraction kit

50次

CS-01F99023

血液DNA是重要的研究材料，但是血液DNA在常溫下存放的時間很短，因此很多血液樣品都是凍凝存放。由于凍存過程中形成的冰晶會刺破細胞膜，釋放出DNA，因此從凍存血液中高效提取DNA一直是個棘手的問題。本產品就是北京我公司開發的專門用于從凍存血液中提取DNA的試劑盒。

產品特點：

1.適用于各種動物血液，包括禽類和昆蟲。

2. 微量提取，每次可處理400μL 血液。

3. DNA 完整性好，純化后長度在20-50 Kb 之間。

4. DNA 純凈，OD260/OD280在1.8-2.0 之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。DNA產量一般在10μg/mL 血液。

5. 操作簡單，整個過程約20分鐘，室溫操作，適合大規模樣品處理。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

使用方法：

1.從-20℃或更低的冰箱中取出血液樣品，室溫下靜置融化。

2. 將400μL 解凍的血液轉移到一個1.5mL的塑料離心管中，加入400μL溶液A，充分震蕩混勻。如果是禽類血液，則少加10倍，只加40μL。

3.在混合液中加入400μL溶液B和200μL 氯仿(自備)，振蕩1分鐘。由于離心管比較滿，所以需要確保管底溶液轉動起來，否則只是液面振動而已。

4. 4℃12000 g離心10分鐘，小心將上清轉移至一新的1.5mL塑料離心管

中。注意：最好不要室溫離心，如果室溫離心，則離心后部分樣品的中間白色層可能會很厚，只能得到很少的上清。

5. 將約0.7-0.8mL上清轉移到10-15mL塑料離心管中(不要使用玻璃離心管，否則DNA 會吸附到管壁上。常用的培養提質粒用的細菌的培養管即可)。

6. 加入2.5倍上清體積的溶液C(2mL)，立即搖晃混勻。

7. 將混合液分多次轉移到離心吸附柱中，每次0.7mL左右，轉移后靜置2-5分鐘，以使DNA與膜充分結合，然后室溫12000 g離心30秒，棄收集管中的廢液，然后再加入0.7mL，重復上述操作，直到全部混合液掛柱。

8.在離心吸附柱中加入0.7mL 通用洗柱液，室溫12000 g離心30秒，棄收集管中的廢液。

9.在離心吸附柱中再加入0.3mL 通用洗柱液，室溫12000 g離心30秒，棄收集管中的廢液。

10.室溫12000 g離心30秒，去盡殘留液體(此步驟十分重要，不要省略，否則殘留的含乙醇的通用洗柱液將抑制后續的酶反應)。

11. 將離心吸附柱置于一新的1.5mL塑料離心管中，加入50μL DNA 洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。如果將DNA 洗脫液2.0在65℃預熱后再使用，洗脫DNA的效果更佳。

12.室溫12000 g離心30秒，離心管底部溶液即DNA溶液，可立即使用或-20℃長期保存。
13. 本產品所用離心吸附柱吸附能力比較強，如果再次用DNA 洗脫液2.0洗脫，還能洗脫下一些血液DNA。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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