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柱式糞便DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99022
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：191
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式糞便DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式糞便DNA提取試劑盒 50次 

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柱式糞便DNA提取試劑盒

Stool DNA column extraction kit

50次

CS-01F99022

本試劑盒是動物糞便DNA提取試劑盒(BTN70601)的柱式升級產品，專門用于從各種動物糞便中快速提取高質量的DNA。

產品特點：

1. 操作更加簡單快速，一個樣品只需要十多分鐘的時間。

2. DNA 更加純凈，OD260/280一般都在1.8以上，得到的DNA樣品原液或稀釋液可以直接用于PCR擴增。

3. 每次微量提取可以處理100-300mg左右的樣品，能得到5μg左右DNA，片段長度在30 Kb左右。

4.可以同時提取到腸道上皮細胞和可能的腸道病原菌的DNA。

5. 試劑無毒無害，環保。

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：

1. 65℃預熱溶液A，待其沉淀溶化后充分混勻，取0.5mL加入到1.5mL塑料離心管中并放置于65℃待用。

2. 稱取 0.1-0.3 g的糞便，加入到含預熱溶液A的離心管中，震蕩器上劇烈震蕩5-10分鐘。如果是擴量操作，可以使用更多糞便和較大離心管。也可以將同一種糞便在較大離心管中震蕩處理，然后再分到1.5mL離心管中。注意:不論使用大的還是小的離心管，一定要讓管底的糞便震蕩起來。

3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5分鐘。

4. 12000～15000g室溫離心3分鐘，將上清轉移到一新離心管中(上清液一般呈淡黃色或深棕色，實際顏色隨樣品而異，上清液的體積一般為300-400μL)。

5.在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白色或淡黃色混濁狀。

6. 將離心管冰浴至少5分鐘。

7. 12000～15000g室溫離心3分鐘，轉移上清到新的1.5mL離心管中，上清液顏色將比第4 步得到的上清的顏色稍淡，體積在0.7mL左右。

 注意：下面第8-第9 步的氯仿抽提操作可以省略，直接進入第10 步，但DNA的產量會低50%左右，OD260/280在1.7-1.8。如果直接進入第10 步，則轉移的溶液體積不要超過0.6mL，否則沒有空間加溶液C。

8. 加入0.2mL的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓管底的溶液震蕩起來。

9. 12000～15000g室溫離心3分鐘，小心轉移上清到新離心管中。說明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機相部分顏色較深，一般呈淡棕色。將上清轉移到新的1.5mL離心管時，不要超過0.6mL，否則沒有空間加溶液C。如果有多余的可以棄之不用。

10. 加入1.5倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻。

11. 分兩次上柱(即先轉移一半的混合液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液)。

12. 加 0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。

13. 如果有必要，可以再加0.3mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。增加一步洗滌能使最后得到的DNA的純度稍有提高，但產量稍微有所降低。

14. 12000～15000g室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會污染DNA。

15. 將離心吸附柱轉移到一新的1.5mL塑料離心管中，加入50-100μl DNA洗脫液2.0。

16.室溫放置離心吸附柱1-2分鐘。
17. 12000～15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA樣品，可以立即使用或存放于冰箱待用。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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