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柱式昆蟲DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99019
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：171
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  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式昆蟲DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式昆蟲DNA提取試劑盒 50次 

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柱式昆蟲DNA提取試劑盒

Insect DNA column extraction kit

50次

CS-01F99019

本試劑盒是專門用于從昆蟲、節肢動物、蛔蟲、扁形蟲和一些富含多糖的動物組織中提取基因組DNA的試劑盒。其原理是基于去垢劑在適當的離子強度條件下，特異地跟基因組DNA結合形成沉淀，然后在用硅膠膜離心吸附法進行進一步純化得到DNA。

產品特點：

適用于用常規方法難以提取的、各種富含多糖的動物，包括昆蟲、節肢動物、蛔蟲、扁形蟲等。

除新鮮樣品外，還適合于各種保存狀態的樣品，包括冷凍的樣品、用乙醇保存的樣品和福爾馬林保存的樣品。

提取到的基因組DNA完整性，長度一般在20～50 Kb。

DNA純凈，OD260/280一般都在1.8左右，可直接用于PCR、酶切、雜交等。

操作簡單，整個過程約30分鐘。

安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

保存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：

稱取0.1～0.3g昆蟲樣品轉移到塑料研缽中，液氮研磨成粉后轉移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。

注意：最好避免使用含二氧化硅的玻璃研缽，因為DNA會吸附在表面，影響得率。

在離心管中加入1mL 65℃預熱的溶液A并用移液槍頭充分吹打混勻(如果溶液A有沉淀，需先在65℃加熱溶解后搖勻再使用)。

65℃保溫5～30分鐘，其間最好吹打混勻2～3次。

12000～15000g室溫離心3分鐘。

將不超過0.75mL的上清轉移到新離心管中。有時候上清液中還會有少量細小懸浮物，但對后續操作沒有影響，不必進行特殊處理。

在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白色混濁狀。

將其置于冰浴中放置5～10分鐘。

12000～15000g室溫離心3分鐘，轉移上清到新的1.5mL塑料離心管中。

加入0.2mL的氯仿(自備)，震蕩器上充分振蕩30秒混勻。

12000～15000g室溫離心3分鐘，兩相交界面將有白色膜狀物，小心轉移上清到新1.5～5mL塑料離心管中。

注意：由于下一步要加1.5倍體積的溶液C，所以新的離心管的體積要足夠大。

加入1.5倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻，然后分多次的將混合液轉移到離心吸附柱中。

每次轉移0.7～0.8mL混合液后，室溫放置5～10分鐘。

12000～15000g室溫1分鐘，棄穿透液。

對需要多次上柱的樣品，可以在此將剩余的樣品加到離心吸附柱式中，重復第12～14步的操作。

將0.7mL通用洗柱液加入離心柱，室溫離心1分鐘，棄穿透液。

在離心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g離心半分鐘(此步為第二次洗滌)。

空甩1分鐘去除殘留液體。

將離心柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中，加入30～100μL DNA洗脫液2.0。

室溫放置5分鐘后離心1分鐘，管底即為昆蟲DNA溶液，可立即使用，也可長期保存在－20℃。
可以重復上步一次，以洗脫更多的DNA。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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