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柱式凝固血液DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99016
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：180
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式凝固血液DNA提取試劑盒現(xiàn)貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式凝固血液DNA提取試劑盒 50次 

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柱式凝固血液DNA提取試劑盒

Coagulated blood DNA column extraction kit

50次

CS-01F99016

本試劑盒是凝固血液DNA提取試劑盒(BTN71002)的升級產品，專門用于從新鮮或凍存的凝固全血(包括人和禽類)中提取基因組DNA。

產品特點：

1. DNA更加純凈，OD260/280在1.8-2.0之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等。

2. 操作更加簡單快捷，比凝固血液DNA提取試劑盒快十分鐘以上。

3. 每克新鮮凝固全血DNA產量為20-50μg DNA。

4. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

1. 65℃預熱溶液A，待其沉淀溶化后，充分混勻，取1mL到10mL或15mL塑料離心管中并將離心管放置于65℃待用。

2. 稱取凝固血液0.1-0.5 g，加入到預熱的溶液A中短暫勻漿。勻漿過程中將產生大量泡沫，屬于正常現(xiàn)象。

 注意：如果是干的血塊，用量不要超過0.2g，但需將干血塊剪成微小的碎片。

3. 將勻漿液置于65℃水浴保溫5分鐘，然后將不超過0.75mL的勻漿液上清轉移到新的1.5mL離心管中。

 注意：盡量不要轉移凝固血液碎片。

4.在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻后冰浴5分鐘。

5. 12000～15000g室溫離心3分鐘，將上清液轉移到新的1.5mL離心管中。

 注意：如果上清液呈紅色，屬于正常現(xiàn)象。

6. 加入0.2mL的自備氯仿，震蕩器上充分振蕩30秒混勻。

7. 12000～15000g室溫離心3分鐘，兩相交界面將有白色膜狀物。將不超過0.6mL的上清液小心轉移到新的1.5mL離心管中。

8. 加入1.5倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻后分兩次轉移到離心吸附柱中，每次轉移后需要12000～15000g離心半分鐘并棄穿透液。

9.在離心吸附柱中加入0.7mL的通用洗柱液，12000～15000g離心半分鐘。

10.在離心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液，12000～15000g離心半分鐘(此步為第二次洗滌，一般可以省略)。

11. 12000～15000g離心半分鐘以去除殘留通用洗柱液。注意：此步不能省略，否則殘留的通用洗柱液會影響DNA的后續(xù)反應。
12. 將離心吸附柱轉移到一新的離心管中，加入100μL 通用洗脫液，12000～15000g離心半分鐘，管底溶液即DNA溶液，可立即使用或放冰箱長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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