產(chǎn)品目錄

拭子是一種常用的的生物樣品取材方法，可以用于PCR等分子生物學(xué)分析。拭子取材的主要特點(diǎn)是快捷和非介入性(不會(huì)對(duì)對(duì)象造成傷害)，尤其適用于大規(guī)模篩查取樣和特殊群體(如兒童)和組織(如口腔)的取樣。市場(chǎng)上專門用于拭子樣品DNA提取的產(chǎn)品不多，為此我司開發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.快速柱式操作，整個(gè)過程只需要十分鐘。

2. DNA純度高，OD比值一般在1.8左右。

3. 回收率高，一般在0.5μg DNA/拭子左右。

4. 環(huán)保安全，不需要使用任何有毒的試劑(包括酚和氯仿)。

5. 提取的DNA能夠用于電泳、酶切、雜交檢測(cè)和PCR。

6. 本產(chǎn)品可以跟拭子保存液(BTN80802)結(jié)合使用，用于提取保存的樣品。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

使用方法：

1. 將拭子涂抹面頰的口腔內(nèi)表面約十次，放入加有0.5mL通用上柱液的1.5mL塑料離心管中。

2. 剪去口腔拭子柄部，留藥棉頭于離心管中，蓋上離心蓋后振蕩一分鐘。

3. 將上清液(約0.4mL)和拭子一起全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。

4. 12000rpm離心一分鐘后棄穿透液和拭子。

5.在離心吸附柱中加入700μl的通用洗柱液，室溫12000rpm離心1分鐘，棄收集管中廢液。

6.室溫12000rpm離心1分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

7. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管(自備)中，加入30-50μl DNA洗脫液，室溫放置2分鐘。

8.室溫12000rpm離心1分鐘，離心管底溶液即DNA。

附:從非凍型拭子DNA保存液保存的拭子中提取DNA(僅供參考，本產(chǎn)品不提供所需試劑，如果需要請(qǐng)另行購(gòu)買)

1. 將0.5mL非凍型拭子DNA保存液加入到自備的1.5mL塑料離心管中待用。

2. 用拭子涂抹口腔內(nèi)表面、鼻腔表面或其他待取樣器管的表面約十次。

3. 將拭子放入到加有的1.5mL塑料離心管中，剪去專用拭子柄部，留藥棉頭于離心管中，蓋上離心管管蓋后即可長(zhǎng)期保存、運(yùn)輸。

4. 保存或運(yùn)輸結(jié)束后將藥棉頭擠干溶液后取出。

5.在剩下的溶液(約0.5mL)中加入1mL通用上柱液，顛倒混勻。

6. 先取0.75mL混合液到離心吸附柱中，室溫12000rpm離心1分鐘后棄穿透液，然后在將剩下的0.75mL混合液到離心吸附柱中，室溫12000rpm離心1分鐘后棄穿透液。
7.其余操作接柱式拭子DNA提取試劑盒操作(見上)的第5步。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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