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柱式血液DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F99012
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：206
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式血液DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式血液DNA提取試劑盒 50次 

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柱式血液DNA提取試劑盒

Blood DNA column extraction kit

50次

CS-01F99012

本試劑盒是基于離心柱/硅膠膜原理的、專門用于從新鮮或冷凍的動物(包括人和禽類)抗凝全血中提取基因組DNA的試劑。

產品特點：

1. DNA純凈，OD260/280在1.8-2.0之間。不含蛋白質和RNA污染，可直接用于PCR、酶切、雜交等。

2.產量高，一般為1-10μg/mL全血(對哺乳動物血液)。

3. 操作簡單，整個過程約20分鐘，全室溫操作，適合大規模樣品處理。

4. 用量廣泛，每次可以處理少達20μl(對禽類動物血液)，多達1mL的血液(對哺乳動物血液)。

5. 安全無毒，本試劑盒對人體無毒，無腐蝕性和刺激性氣味。

儲存條件：常溫運輸、4℃保存，有效期一年。

使用方法：

1.在0.02-1mL新鮮或抗凝血液(冷凍血需先37℃水浴融化)中加入0.5mL紅細胞裂解液(A型)，吹打混勻。

a)哺乳動物，血液使用量以300μl以下為宜，使用量越大產量越高，但產率會降低。如果血液多于300μl，重復1-2步兩次可以提高產率。

b)禽類動物，血液使用量以20μl以下為宜，可以從第3步做起。

2.室溫12000～15000rpm離心5分鐘，沉淀呈粉紅色，小心傾去上清。

3. 再短暫離心半分鐘，吸棄殘留的液體。此步有利于后面的細胞裂解，但一般可以省略。

4. 向有沉淀的離心管內加入0.5mL溶液A(溶液A有少量晶體沉淀，用前需要搖晃均勻)，用移液槍吹打使沉淀充分懸浮起來。此步目的是裂解細胞，釋放DNA，所以吹打越充分越好。

5. 靜置2分鐘待溶液變清亮后，將液體轉移到離心吸附柱中并靜置2-5分鐘，以使DNA與膜充分結合。

6. 12000rpm離心半分鐘，DNA將吸附到膜上，棄收集管中的廢液。

7. 加入0.7mL的通用洗柱液，12000rpm離心半分鐘，棄收集管中的廢液。

8. 加入0.3mL的通用洗柱液，12000rpm離心半分鐘，棄收集管中的廢液。

9. 12000rpm離心半分鐘，甩干殘留液體。此步很重要，以去除膜上殘留通用洗柱液，否則會影響后續反應。

10. 將離心吸附柱置于一新的1.5mL塑料離心管(自備)中，加入適量50μl DNA洗脫液2.0，室溫放置2分鐘。如果將DNA洗脫液2.0在65℃預熱后再使用，洗脫DNA的效果會更好。
11. 12000rpm離心半分鐘，離心管底溶液即DNA溶液。可以立即使用或放冰箱長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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