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柱式植物油DNA提取試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F99007
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：201
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：柱式植物油DNA提取試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，價格實惠。

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標簽:柱式植物油DNA提取試劑盒 50次 

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柱式植物油DNA提取試劑盒

Vegetable oil DNA column extraction kit

50次

CS-01F99007

本試劑盒是專門用于從各種植物油樣品中提取微量植物油DNA的產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點：

1. 操作簡單，整個過程只需要20分鐘左右，不需要額外地在洗柱液中補加乙醇。

2. 靈敏度高，通過PCR 檢測到的單拷貝的基因。

3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。

4.與PCR和熒光PCR 兼容。

5. 價廉物美，性價比遠低于國外同類產(chǎn)品。

6.適用于各種材料，包括花生油、色拉油、醬油、菜籽油等樣品。

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：

1.在1.5mL離心管中加入0.2mL液體植物油樣品。

2. 加入0.6mL溶液A，室溫振蕩3～5分鐘。注意：在4℃保存的溶液A會形成沉淀，用前需要加熱到65℃使之徹底溶化。

3. 將溶液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。注意：不能只取水相。

4. 12000～15000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

5. 加入0.8mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心1分鐘，棄收集管中穿透液。

6. 12000～15000g室溫離心半分鐘。

7.在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-50μl DNA 洗脫液，然后將離心吸附柱套入一新的1.5mL離心管中，室溫放置2分鐘。

8. 12000～15000g室溫離心1分鐘，離心管中收集的樣品即為植物油DNA。
9. DNA樣品可以直接用于PCR，也可放-20℃長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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