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產品屬性：
| 產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
| 柱式植物葉綠體DNA提取試劑盒 | Plant Chloroplast DNA column extraction kit | 15次 | CS-01F99003 |
介紹本產品是結合植物葉綠體純化試劑盒和柱式植物DNA抽提試劑盒而推出的試劑盒，專門用于植物葉綠體DNA的快速提取。
| 產品特點： 純度高，不含污染和抑制劑，可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、multiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting,microsatellite analysis等各種后續分子生物學實驗，不會發生離心柱堵塞現象。 產率一般在1～2μg/1g葉片樣品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段長度一般在40～50 Kb左右。 本產品足夠15次提取，每次可處理30g葉片。 已經成功用于菠菜，大豆，萵筍，白菜，煙草和甜菜等雙子葉植物，也適用于單子葉等其他植物（可能需要優化條件）。 保存：RT，其中勻漿液成分二需4℃保存，有效期1年。 自備器材： 去離子水、氯仿、Waring勻漿機、燒杯、量筒。 使用方法： 注意：葉綠體對溫度高度敏感，所以整個操作必須在冰上或者在冷室進行，所用器皿和溶液均需要在4℃預冷。離心時一定要在4℃進行，離心力以g而不是rpm計算。如果需要研究葉綠體的功能，提取還需要在昏暗的光線條件下進行。強烈建議用顯微鏡監控整個過程中葉綠體的回收情況。 一、葉綠體的純化 實驗前1～2天將植物放在暗室培養以減少葉綠體中淀粉顆粒的形成，否則離心時這些顆粒很容易使葉綠體破裂。葉片在實驗前需先用自來水洗凈，再用蒸餾水淋洗，去掉多余水分。如果葉片采集后不能立即處理，則保存時需要保持葉片濕潤，即使如此，葉片的放置時間也不能超過一天。 計算實驗所需勻漿液的體積。本試劑盒一次實驗可處理30g葉片，對一般植物，每克葉片需要準備4mL勻漿液，則一次實驗需要準備120mL勻漿液。對煙草和大豆，每克葉片需要6mL勻漿液，則一次實驗需要準備180mL勻漿液。為了保險最好可以多配10%。 實驗當天制備勻漿液。制備方法是：將自備的去離子水與葉綠體純化勻漿液成分一在干凈的玻璃或塑料容器中按4：1的比例混合，然后在每100mL混合液中加入勻漿液成分二干粉0.1g（終濃度為0.1%），輕柔攪拌10分鐘后，所得溶液即為勻漿液。冰上預冷待用。勻漿液只能當天使用，不能放置。 預留1.5mL勻漿液用于懸浮葉綠體，其余勻漿液轉移到Waring勻漿機（即家用制備果汁的勻漿機）中，再快速將新鮮植物葉片的葉脈去除，再將葉片剪成1-3cm2大小的碎片，浸泡在勻漿機里面的勻漿液中。 低速勻漿10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的葉碎片按入到勻漿機底部，再低速勻漿10秒。注意：理論上可用Dounce玻璃勻漿器，Polytron勻漿機和研磨（加玻璃珠）等勻漿，但它們單次處理量小，需分成很多份處理后再匯集，非常不方便。 用試劑盒提供的帶柄尼龍濾篩過濾勻漿液，用預冷的200mL量筒收集穿透液，再等分到4個預冷的50mL的塑料離心管中（每個管中的穿透液不要超過35mL）。帶柄尼龍濾篩洗滌干凈后可反復使用。 在水平轉子離心機上4℃ 200g離心3分鐘（對菠菜，白菜和萵筍材料）或400g離心1分鐘（對甜菜材料），白色沉淀為未破裂的細胞或細胞核。其他植物材料則需要用戶自己摸索最佳離心力。 將上清液（含葉綠體）轉移到一個新的、預冷的50mL塑料離心管中。 在水平轉子離心機上4℃ 1000g離心7分鐘，小心棄上清，沉淀含葉綠體。 在沉淀中加入第4步預留的1.5mL預冷勻漿液，用軟毛筆使葉綠體重懸，如果有白色淀粉沉淀，重懸時避免重懸白色淀粉。 加入1.5倍體積(約1.2mL)的溶液C，顛倒混勻后先轉移0.7mL到離心吸附柱中，室溫放置至少2分鐘。12000rpm室溫離心1分鐘，DNA將吸附在離心吸附柱的膜上，倒棄收集管中的穿透液。 再將剩余的溶液按上步方法上柱。 將0.5mL通用洗柱液加入到吸附柱中，12000rpm室溫離心1分鐘，棄穿透液。重復操作一次。空甩半分鐘去除殘留液體。 將離心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中，加50～100μL DNA洗脫液2.0，室溫放置3～5分鐘。 |
原創作者：上海莼試生物技術有限公司
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