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柱式病毒DNA提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F98999
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：184
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：50次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：柱式病毒DNA提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:柱式病毒DNA提取試劑盒 50次 

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柱式病毒DNA提取試劑盒

Virus DNA column extraction kit

50次

CS-01F98999

介紹本試劑盒是在一管式病毒DNA提取試劑盒的基礎上開發的、專門用于從血清(血漿)等液體樣品及拭子(咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、陰道拭子等)中提取微量病毒DNA的產品。

試劑盒特點：

1. 操作簡單，整個過程只需要20分鐘左右，不需要額外在洗柱液中補加乙醇。

2. 靈敏度高，通過PCR 檢測到的最終靈敏度可以達到30-50拷貝/mL。

3. 安全無毒，不需要使用苯酚和氯仿等有機溶液。

4. 如果加上病毒離心富集步驟，最多可以處理1.5mL液體病毒樣品。

5.與PCR和熒光PCR 兼容。

6. 價廉物美，性價比遠高于國外同類產品。

7.適用于各種材料，包括血清、血漿、腦脊液、尿液、糞便、培養細胞上清液等無細胞材料。

儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

使用方法：

1. 對于液體病毒樣品：在1.5mL離心管中加入0.1-0.2mL液體病毒樣品。如果病毒需要富集，可以將1.5mL液體在4℃ 24,000 g 冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL后剩下的0.2mL 用于第2 步處理。對于拭子樣品：將一個拭子放入離心管中，加入1mL自備的生理鹽水，振蕩器上充分振蕩半分鐘，然后轉移0.2mL 到1.5mL塑料離心管中，用于第2 步處理。

2. 加入0.6mL溶液A到第一步得到的0.2mL樣品中，振蕩30秒混勻后室溫放置10分鐘。注意：溶液A在4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 短暫離心后將500μl溶液轉移到離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

4. 12000rpm室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

5. 將剩余溶液短暫離心后全部轉移到步驟3的離心吸附柱中，室溫放置2分鐘。

6. 12000rpm室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

7. 加入0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心1分鐘，棄收集管中的穿透液，把離心吸附柱放回到收集管中。

8. 12000rpm室溫離心1分鐘(干甩)，棄含穿透液的離心管。

9. 將干甩后的離心吸附柱套入到一個自備的RNase-free的1.5mL離心管中，在離心吸附柱的濾膜的中部加入30-100μl DNA 洗脫液3.0，然后室溫放置2分鐘。

10. 12000rpm室溫離心1分鐘，離心管中的溶液即為病毒DNA溶液。
11. DNA樣品可以直接用于PCR，也可放-20℃長期保存。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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