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酵母細胞蛋白裂解液

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  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：10次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：酵母細胞蛋白裂解液現貨供應，價格實惠。

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標簽:酵母細胞蛋白裂解液 10次 

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酵母細胞蛋白裂解液

Yeast Total Protein Lysis Buffer

10次

CS-01F98662

本產品利用表面活性劑和蛋白變性劑使樣品快速充分破裂從而釋放蛋白質，內含作用烈的蛋白酶抑制劑，從而保證了蛋白質的完整性。適用于酵母天然總蛋白和重組的蛋白質的變性提取，提取的蛋白質可以用于SDS-PAGE，Western blot等實驗。

保存：-20℃，避免反復凍融，有效期2年。

使用方法：

將過夜培養的酵母培養物大約1.5mL，8000rpm(5700g)離心1min。

按照每20mg濕重加溶液A 1mL、溶液B 10μL和溶液C 1μL。

在渦懸振蕩器上振蕩30sec，讓菌體充分懸浮。

在室溫下，放在脫色搖床上輕輕振蕩30min。

轉置冷凍離心機中，4℃，12000rpm(12830g)離心5min，取上清用于后續實驗。

注意事項：

溶液A在-20℃的冰箱保存，如果產生沉淀，可以先水浴30℃加熱5min，使其充分溶解。

充分裂解后溶液中已經看不到泥漿樣懸浮顆粒存在，但是溶液還不是很透明。

在執行步驟4后，將試管放入冰箱或液氮中凍融一次，可以促進蛋白質的完全釋放。

產品中的保存條件及有效期均以未開封情況下計算，為了防止產品與空氣接觸發生化學反應影響產品性能，將未使用完畢的組分按存儲要求保存同時建議開封后的組分盡快使用完畢。

使用后請旋緊瓶蓋，防止溶液揮發和與空氣中的物質發生化學反應。
本試劑只能夠用于體外實驗，不能夠用于臨床、治療和動物體內實驗等，由此產生的后果，概不承擔責任。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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