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超低分子量蛋白Marker(3.3～20.1kDa)

  • 產品貨號：CS-01F98648
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 方法：
  • 含量：15T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：超低分子量蛋白Marker(3.3～20.1kDa)現貨供應，價格實惠。

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標簽:超低分子量蛋白Marker(3 3～20 1kDa) 15T 

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超低分子量蛋白Marker(3.3～20.1kDa)

Protein Marker(3.3kD-20.1kD)

15T

CS-01F98648

本產品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質組成，分子量范圍為3.3kD～20.1kD。可以用來判斷SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品為蛋白質和多肽混合物的凍干粉，每種蛋白含量約為15～22.5μg，配有一支1×上樣緩沖液。

凝膠制備及染色注意事項：

1．先配制分離膠，聚合后再配制夾層膠，后配制濃縮膠，3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時，30v跑1～2小時后，待指示前沿到達分離膠上沿時，把電壓調至100v，至電泳結束，整個電泳過程大約需要6～8小時。

2．由于多肽所含的氨基酸數目較少，因此如該多肽含有過多的極性氨基酸(堿性或酸性)，則會影響其在SDS-PAGE圖上的條帶遷移率，即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。

3．由于SDS-PAGE的圖譜上，蛋白質對數分子量和遷移率成正比直線關系的分子量范圍為15,000～200,000，因此對于分子量小于10000的蛋白質或多肽的分子量，只能根據標準分子量進行估計，推斷其是否落入預測的分子量范圍。

4．由于低分子量多肽（3000及3000以下），極易從凝膠上浸出，因此染色及脫色時間不宜太長，脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過久，否則條帶會消失。

5．電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘，再進行染色，能得到較好的蛋白條帶；如時間不允許，也可不進行固定直接染色。如果使用配方7進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液，該產品具有染色快，無毒，靈敏性高等特點，是常規染色液的替代品。
儲存條件：-20℃保存，有效期為一年。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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