產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
彩虹預(yù)染蛋白Marker(11～245KD)	ColorMixed Protein Marker(11-245KD)	100ul(20T)\|250ul(50T)\|2250ul(100T)\|10250UL(500T)	CS-01F98647

本產(chǎn)品包含12種彩色預(yù)染的已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白，分子量范圍為11～245kD，每種蛋白含量約為0.2-0.4mg/ml。預(yù)染marker可以用于直接觀察蛋白質(zhì)電泳狀況以及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)膜效果。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳或轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可得到清晰的10條彩色蛋白條帶，其中25kD為綠色條帶，75kD為紅色條帶，其余10條是藍(lán)色條帶。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

•三色預(yù)染，顏色鮮亮，條帶整齊，便于觀察。

•穩(wěn)定性能突出，經(jīng)檢測4℃放置兩年無明顯降解。

•用量少，節(jié)約成本，僅5μl即可呈現(xiàn)（1.5mm，10孔梳）。

•廣譜多帶，一支即可滿足多種實(shí)驗(yàn)需求。

使用說明：

1．本產(chǎn)品是即用型液體，可直接上樣電泳。上樣前無需加熱，稀釋或添加還原劑。

2．上樣5μl，SDS-PAGE電泳過程及轉(zhuǎn)膜后可看見清晰的彩虹條帶。

3．建議分離膠濃度為15%。

注意事項(xiàng)：

1．本產(chǎn)品含有較高濃度甘油，常規(guī)-20℃保存為液體狀態(tài)，可直接使用。若冰箱溫度不穩(wěn)，導(dǎo)致結(jié)冰，可適當(dāng)分裝后置于4℃保存，至少穩(wěn)定6個(gè)月。

2．Marker分離效果與PAGE膠濃度相關(guān)，若分離膠濃度低于15%，25kD以下條帶不易分離，但不影響綠色（25KD）及以上條帶。如果目的條帶小于25KD，建議分離膠濃度大于或等于15%。

3．轉(zhuǎn)膜效果與轉(zhuǎn)膜時(shí)間有關(guān)，需根據(jù)客戶目的條帶大小而定，如果轉(zhuǎn)膜后較大分子量條帶有部分未轉(zhuǎn)膜成功，屬于正常現(xiàn)象。
儲存條件：-20℃

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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