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本試劑盒包含Ni-Agarose 填料、親和柱空柱以及可溶性His 融合蛋白純化所需的全部試劑(細菌裂解液、蛋白酶抑制劑混合物、結合緩沖液和洗脫緩沖液組分)，使用方便。該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠高效一步純化帶有6個組親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA 結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。

His標簽蛋白純化試劑盒提供全套試劑，適用于從各種樣品中純化帶有6×His標簽的蛋白。本試劑盒填料支持物為CL-6B 瓊脂糖凝膠，載量為20mg His標簽蛋白/ml填料。

本產品已螯合鎳離子，可直接用可溶性蛋白的純化，使用方便，快捷。使用pH 為3-13的范圍內都能有好的純化效果,pH2和pH14的條件下也可以短期使用。填料可重復使用。

我公司可以提供針對動物細胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、液體、土壤等不同樣本的蛋白提取試劑盒，包含用于非雙向電泳和雙向電泳等不同下游應用的試劑盒以及含去垢劑成分和不含去污劑成分的蛋白提取試劑盒，專用于蛋白質譜檢測的試劑盒等總計300多種蛋白提取試劑盒可供選擇。我公司還可以提供針對動物、植物等不同樣本的細胞核、線粒體、溶酶體、葉綠體等不同細胞器的提取試劑盒。

儲存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存；其他2-8℃保存；避免冷凍。

有效期：一年。

使用前請仔細閱讀產品說明書

使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

產品更新：我司會更新或升級產品，以優化和增其使用性能，產品說明書會進行相應的版本更新。使用產品時，請參照隨產品附帶的說明書，不要參照網上下載的說明書，可能是不同的版本。

使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

儀器：

●離心機● 振蕩器● 渦旋混勻器● 移液器●冰箱●冰盒

試劑：

● 純水

耗材：
●離心管● 吸頭

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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