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PMSF

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：1ml|10ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：PMSF現貨供應，價格實惠。

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標簽:PMSF 1ml 10ml 

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產品屬性： 

產品名稱

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規格

貨號

PMSF

 

1ml|10ml

CS-01F98471

由于本產品有毒，建議使用與本品作用一樣的無毒替代產品AEBSF，需要請聯系我公司。

儲存條件：-20℃保存。

有效期：一年。

PMSF(苯甲基磺酰氟)采用進口高品質原料配制。濃度為200mM。PMSF 為不可逆的絲蛋白酶抑制劑，常用于蛋白提取過程中的抑制劑使用。可抑制羧肽酶Y,糜蛋白酶,Factor Xa,木瓜蛋白酶,纖溶酶,蛋白酶K,枯草桿菌蛋白酶,凝血酶及等。PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加于裂解緩沖液中。

PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH 值的升高而加快，25℃的失活速率高于4℃。

pH值為8.0時，20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min。

注意事項：

●本試劑僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

● 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。

● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

● PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF，應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。

使用注意事項：

1．可將PMSF用異丙醇稀釋后小量分裝后-20℃保存。

2．蛋白酶抑制劑混合物使用前根據需要量加入裂解液，不可以一次全部加入裂解液后長期存放。

使用方法：
根據需要加入組織細胞裂解液中，混勻即可。有效使用濃度一般為0.1-1mM。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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