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核酸去除液

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：1ml|5ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：核酸去除液現貨供應，價格實惠。

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標簽:核酸去除液 1ml 5ml 

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核酸去除液

 

1ml|5ml

CS-01F98469

產品簡介：

來自細胞或組織材料的核酸往往對蛋白研究產生干擾，穩定、高效地排除核酸對蛋白質及其下游分析的影響，是獲得好的蛋白研究相關數據的訣竅之一。

在細胞中，核酸和蛋白相對有各自分布的區域，而進行抽提時，細胞的天然結構被破壞，核酸與蛋白混合在一起，就會造成一些目標蛋白或多肽發生沉淀丟失，或者由于核酸和蛋白的結合造成電泳（特別是2D）中蛋白泳動表現改變和一些遷移假象、條紋等情況。很多操作者采用機械法，比如聲波處理等，或DNase及RNase消化來減少或消除核酸的影響，但是由于操作是非標準化操作，往往很難評估核酸清除步驟的有效性和數據穩定性。

核酸去除液是一種全能酶，可以降解所有形式的DNA和RNA(單鏈、雙鏈、線形和環狀)，而無蛋白水解活性。其在廣泛的條件下都能保持很高的活性和特異性。核酸去除液能迅速水解核酸，從而成為降低粘度，節省時間，增加蛋白產量的理想工具。

使用方法：

每100μL蛋白裂解液中加入10μL核酸去除液，混勻。

于室溫放置30分鐘～1小時。

在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。

將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到除去核酸的蛋白樣本。

將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

注：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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