產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒	Plant membrane protein / chloroplast protein extraction kit	50T\|100T	CS-01F98410

葉綠體是植物細(xì)胞所特有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對象。

葉綠體蛋白/膜蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體蛋白和植物膜蛋白，提取過程簡單方便，可在一小時內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體蛋白和膜蛋白。

本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、葉綠體膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用我公司其他貨號的試劑盒。也可以將后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理(相關(guān)產(chǎn)品HR0389)。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡單方便，速度快，可在1小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時較長。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據(jù)實際需要選擇試劑盒。

我公司可以提供針對動物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、液體、土壤等不同樣本的蛋白提取試劑盒，包含用于非雙向電泳和雙向電泳等不同下游應(yīng)用的試劑盒以及含去垢劑成分和不含去垢劑成分的蛋白提取試劑盒，總計300 多種蛋白提取試劑盒可供選擇。我公司還可以提供針對動物、植物等不同樣本的細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、葉綠體等不同細(xì)胞器的提取試劑盒。

儲存條件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。
有效期：一年。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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