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膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)

  • 產品貨號：CS-01F98365
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 方法：
  • 含量：50T|100T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)現貨供應，價格實惠。

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標簽:膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用) 50T 100T 

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膜蛋白提取試劑盒(2D電泳用)

Membrane protein extraction kit (2D electrophoresis)

50T|100T

CS-01F98365

哺乳動物跨膜蛋白承擔各種生物功能，在疾病的發生、發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套，因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。傳統制備膜蛋白樣品的方法是使用去污劑和表面活性劑增溶。

去污劑處理會使膜蛋白喪失其天然結構，因而妨礙了膜蛋白的功能研究。

雙向電泳膜蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從細胞和動物組織提取雙向電泳用膜蛋白樣品。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。提取的蛋白可直接用于雙向電泳蛋白研究。

儲存條件：蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白提取液A和B 2-8℃保存；試劑C室溫保存。

有效期：一年。

注意事項：

●本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

● 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。

● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

產品特點：

1．使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、聲破碎等前處理。

2．將蛋白提取的時間縮短至 30分鐘-1小時。

3．含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4．紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5．蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。

該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲蛋白酶、半胱酸蛋白酶、天冬蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器、吸頭 ●離心機及離心管
● 渦旋振蕩器 ●冰箱，冰盒
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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