產品目錄

SDS-PAGE電泳后，蛋白質按照分子量大小分離，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶標記的抗體起反應，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光。經顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶(抗原所在位置)。

本試劑盒主要用于western blotting的化學發(fā)光顯色，含有HRP標記抗小鼠IgG二抗。

試劑盒組分：

封閉試劑———————————30g(可配制400ml)

10倍濃縮抗體稀釋液——————50ml

HRP標記小鼠IgG二抗——————0.3ml，效價1:500～1000

ECL顯色液-——————————25mlA+25mlB

注意事項：

1.請根據一抗來源選擇試劑盒。

2.可以根據顯色結果來優(yōu)化實驗反應時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長終漂洗次數與時間。如果

條帶過弱，可增加抗體濃度，可延長抗體孵育時間或加長感光時間。

3.TBS-T(0.01M，PH7.6)配制方法：稱取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml的雙蒸水溶解，用鹽酸調PH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用雙蒸水加至1000ml，混勻即可。(也可按照自己的配制習慣來配制)
儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關法律、法規(guī)，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發(fā)布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。

您感興趣的產品*
您的單位*
聯(lián)系人*
聯(lián)系電話*
詳細地址*
常用郵箱*
請輸入您對我們的意見或建議*
驗證碼*

同類產品

正釩酸鈉 ,≥90% (titration) Calyculin A ,≥90% (HPLC) PAGE電泳預制膠(Tris-Gly體系,15孔,8%) TPCK(蛋白酶抑制劑) ,≥97% (TLC), powder 膦酰二肽鈉 ,≥97% (HPLC) 亮抑酶肽 ,≥90% (HPLC) 亮抑酶肽 ,≥95% (HPLC) 亮抑酶肽鹽酸鹽 ,≥90% (HPLC) 亮抑酶肽三氟乙酸鹽 ,≥90% (HPLC) α2巨球蛋白(來源于人血漿) ,≥98%(SDS-PAGE)

訂購流程

訂貨流程

產品訂購說明:

1、報價含普票、運費。

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發(fā)貨。

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

5、如需代為檢測，標本對環(huán)境溫度高，可聯(lián)系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發(fā) 損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發(fā)貨，報賬后付款（此條款僅限醫(yī)院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

賬戶名：上海生物

開戶行：中國銀行山東省分行營業(yè)部

賬號：2169 2341 6278

為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個銀行的賬戶，學校、醫(yī)院客戶購買產品如因單位財務制度原因可先發(fā)貨待報賬后匯款，請及時告知銷售人員已做具體操作。

世俱杯2025赛程_中国足彩网首页官网_埃弗顿vs托特纳姆热刺_中国女排现状 - 奥运女足历届冠军一览表

ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒(小鼠IgG)

產品目錄

聯(lián)系我們

技術服務

商品詳情購物流程代測服務付款方式常見問題

在線咨詢

同類產品

訂貨流程

付款方式