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堿性磷酸酶活性檢測試劑盒

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 庫存：100
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  • 含量：100T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：堿性磷酸酶活性檢測試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:堿性磷酸酶活性檢測試劑盒 100T 

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堿性磷酸酶活性檢測試劑盒

Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit

100T

CS-01F98229

本品為堿性磷酸酶活性檢測試劑盒，可快速、便捷地檢測細胞或組織裂解液/勻漿液、血清、血漿、尿液、純化酶等樣品中的ALP活性。該試劑盒包括標準品和空白對照，可進行達100個樣品的檢測。

堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，簡寫為ALP或AKP），又稱堿性磷酸酯酶，是一組同工酶，目前已發現六種ALP1-ALP6。廣泛分布于人體、骨骼、腸、腎和胎盤等組織，是經向外排出的一種酶。堿性條件下可催化磷酸酯鍵的水解，從而將底物分子上的磷酸基團去除，轉化為羥基。此類底物包括核酸（DNA、RNA）、蛋白、生物堿等。常見的有腸道堿性磷酸酶、非組織特異性堿性磷酸酶、胎盤堿性磷酸酶等；生物學中堿性磷酸酶（ALP）水平的變化及其活性的高低常被作為一種檢測組織行為的指標，如：1）作為iPS成功誘導的標志；ALP在大多數細胞類型中均有表達，但是在iPS細胞內的表達水平明顯升高；2）結腸癌細胞分化程度定性和定量的指標；3）血清中堿性磷酸酯酶的升高可導致高堿性磷酸酶血癥，常被認為和惡性管阻塞，原發性硬化管炎，肝癌，肝硬化等肝疾病密切相關；4）血清中堿性磷酸酶活性升高還和骨骼損傷導致的骨生成，以及骨骼疾病如纖維骨炎、佝僂病、成骨不全等密切相關；5）堿性磷酸酶水平也會出現一些病理性降低的情況，多見于重癥慢性腎炎、兒童甲狀腺機能不全、貧血等。對于正常成人來說，血清內ALP的范圍為40-150U/L。

對磷酸（p-nitrophenyl phosphate, pNPP）是一種常用的磷酸酶顯色底物，堿性條件下，可在ALP作用下生成對酚（p-nitrophenol, pNP），后者在堿性環境下呈黃色產物，并在405nm處可檢測到大吸收峰。產物黃色越深，說明ALP活性越高，反之則活性越低。因此，通過檢測OD405吸光值即可計算ALP活性水平。
儲存條件：-20℃，有效期一年。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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