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牛凝血酶(高活力，>2000 IU/mg)

  • 產品貨號：CS-01F98220
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：1KU|2KU
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：牛凝血酶(高活力，>2000 IU/mg)現貨供應，價格實惠。

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標簽:牛凝血酶(高活力 >2000 IU/mg) 1KU 2KU 

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牛凝血酶(高活力，>2000 IU/mg)

Bovine Thrombin

1KU|2KU

CS-01F98220

凝血酶是由大小分別為31KD和6KD的兩條肽鏈通過二硫鍵組成的一種絲蛋白水解酶，可從動物血漿中利用已激活凝血酶原水解制得，可催化纖維蛋白原（fibrinogen）水解釋放A肽和B肽，由此形成纖維蛋白單體，單體進一步聚合，在血小板、紅細胞和白細胞等參與下形成血凝塊，常用于診斷學中凝血化驗、檢測、血液或血漿的脫纖維化等；另外，由于凝血酶切割序列專一，水解效率高，因此在分子生物學、生物化學或生物工程制藥研究中也常作為工具酶用于重組融合蛋白（包含凝血酶識別位點）的特異性斷裂。

本品是從牛的血漿純化制得，具有純度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、滅活病毒、生產穩定性好等特點。該酶適切割位點：A-B-Pro-Arg-▼-X-Y （其中，A和B為疏水氨基酸，X和Y為非酸性氨基酸），常見的識別序列為：1. Leu-Val-Pro-Arg-▼-Gly-Ser。2. Gly-Arg-▼-Gly。

英文別名：Coagulation factor II

CAS：9002-04-4

分子量：37KD

比活度：＞2000 IU/mg protein

外觀：凍干粉末

純度：SDS-PAGE檢測圖譜無雜蛋白條帶

濕度： ≤5% w/w

使用方法（切割體系）

本品有效切割質量比1:2000，通常在未做過預實驗的情況下建議在1:1000質量比進行體系的優化，即1mg的目的蛋白加入2U的酶（2000U/mg），使用時可用生理鹽水將酶配成100U/ml ，有效消化緩沖液：20mM Tris-HCl，含150mM NaCl，pH8.0。在20℃-37℃切割0.3-16h。

【注】：

① 具體反應溫度可根據融合蛋白的性質而定，如需要低溫保存的蛋白，可在4℃切割24h。

② 因為凝血酶會吸附在玻璃上，建議用塑料管分裝凍存（-20℃）凝血酶溶液。
儲存條件：4℃，有效期36個月。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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