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人源高氧化程度低密度脂蛋白

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  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：2mg
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：人源高氧化程度低密度脂蛋白現貨供應，價格實惠。

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人源高氧化程度低密度脂蛋白

Human High Oxidized Low Density Lipoprotein (Human High Ox-LDL)

2mg

CS-01F98171

我司提供的人源高氧化低密度脂蛋白（Human High Oxidized Low Density Lipoprotein，High Ox-LDL），是由過度銅離子介導人血漿來源的LDL進行的氧化修飾。新鮮血漿經檢測為HCV，HBsAg和HIV陰性。本產品為無菌包裝，可以直接稀釋使用。本High Ox-LDL具有的高氧化水平使其產生明顯的氧化應激，能夠用來誘導細胞凋亡，以及建立細胞損傷模型。我們還提供中等氧化程度的Ox-LDL（SY0439），廣泛用于脂質代謝的研究。除提供Ox-LDL，我們還提供人源乙酰化LDL（Ac-LDL），以及熒光標記的LDL。

LDL是由極低密度脂蛋白（VLDL）轉變而來，主要功能是把運輸到全身各處細胞，運輸到合成酸，其可用于研究受體介導的內吞作用過程，尤其是在動脈粥樣硬化等疾病中，其血漿來源的LDL可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

氧化的LDL（Ox-LDL）是修飾LDL中的一類。修飾的LDL除包括氧化修飾的LDL外，還包括乙酰化LDL及丙二醛（MDA）、4-羥烯酸（4-HNE）直接結合的LDL，這些未經氧化修飾而僅經一般化學修飾的LDL稱為衍化的LDL。不同于衍化的LDL，Ox-LDL的生理學獨特性表現在：1）在細胞生理功能影響上，Ox-LDL可誘發細胞毒性作用，影響花生四烯酸的代謝，抑制酯化作用等，但衍化的LDL無上述效應；2）Ox-LDL消耗LDL內源性抗氧化物質，使LDL上的含量下降，而MDA-LDL無上述效應；3）氧化修飾涉及脂質過氧化反應，LDL中的PUFAs被氧化。MDA對LDL修飾，是直接和ApoB-100結合成希夫氏堿，脂質過氧化反應輕微；4）氧化LDL在氧化程度低時，ApoB降解；在氧化程度高時，ApoB又可發生再聚合。MDA對LDL的修飾，ApoB無降解、聚合反應發生；5）Ox-LDL產生的熒光峰波長為430nm，而MDA -LDL的熒光峰波長為460nm。Ox-LDL不經LDL受體代謝，由清道夫受體識別、結合、內吞飲入細胞并喪失正常的代謝途徑，引起細胞內脂質沉積，泡沫樣變。

LDL氧化修飾的方式有很多種，常見的有：1）細胞介導的LDL氧化修飾，又稱為生物氧化修飾的LDL。如內皮細胞，巨噬細胞，單核細胞都具有此功能；2）過度金屬離子介導的LDL氧化修飾，如Ca2+，Fe2+等；還有其他形式的氧化修飾，包括物理方法如紫外線，或過氧化物酶催化。

蛋白純度：＞97%（瓊脂糖凝膠電泳）

蛋白濃度：0.8-3.0mg/ml

外觀：無色乳狀液體

緩沖液組分（Buffer Components）：PBS,pH7.4

氧化程度（Oxidized Level）：TBARS檢測（根據MDA的含量反映LDL的氧化程度）

起始LDL：0.1~0.5nmol MDA/mg蛋白

高Ox-LDL：90~100nmol MDA/mg蛋白
儲存條件：4℃，避光，有效期4周
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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