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人源紅色熒光標記氧化型低密度脂蛋白

  • 產品貨號：CS-01F98170
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：188
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：500μg
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
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簡介內容：人源紅色熒光標記氧化型低密度脂蛋白現貨供應，價格實惠。

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標簽:人源紅色熒光標記氧化型低密度脂蛋白 500μg 

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人源紅色熒光標記氧化型低密度脂蛋白

Human DiI-Oxidized Low Density Lipoprotein (Human DiI-Ox-LDL)

500μg

CS-01F98170

我司提供的Human DiI-Ox-LDL為無菌包裝，可以直接稀釋使用。除提供DiI-Ox-LDL，我們還提供不帶標記的Ox-LDL，Ac-LDL（乙酰化修飾）以及不經修飾的LDL等。

LDL是由極低密度脂蛋白（VLDL）轉變而來，主要功能是把運輸到全身各處細胞，運輸到合成酸，其可用于研究受體介導的內吞作用過程，尤其是在動脈粥樣硬化等疾病中，其血漿來源的LDL可用于研究LDL在功能和代謝中的氧化作用。

氧化的LDL（Ox-LDL）是修飾LDL中的一類。修飾的LDL除包括氧化修飾的LDL外，還包括乙酰化LDL及丙二醛（MDA）、4-羥烯酸（4-HNE）直接結合的LDL，這些未經氧化修飾而僅經一般化學修飾的LDL稱為衍化的LDL。不同于衍化的LDL，Ox-LDL 的生理學獨特性表現在：1）在細胞生理功能影響上，Ox-LDL可誘發細胞毒性作用，影響花生四烯酸的代謝，抑制酯化作用等，但衍化的LDL無上述效應；2）Ox-LDL消耗LDL內源性抗氧化物質，使LDL上的含量下降，而MDA-LDL無上述效應；3）氧化修飾涉及脂質過氧化反應，LDL中的PUFAs被氧化。MDA對LDL修飾，是直接和ApoB-100結合成希夫氏堿，脂質過氧化反應輕微；4）氧化LDL在氧化程度低時，ApoB降解；在氧化程度高時，ApoB又可發生再聚合。MDA對LDL的修飾，ApoB無降解、聚合反應發生；5）Ox-LDL 產生的熒光峰波長為430nm，而MDA -LDL的熒光峰波長為460nm。Ox-LDL不經LDL受體代謝，由清道夫受體識別、結合、內吞飲入細胞并喪失正常的代謝途徑，引起細胞內脂質沉積，泡沫樣變。

LDL氧化修飾的方式有很多種，常見的有：1）細胞介導的LDL氧化修飾，又稱為生物氧化修飾的LDL。如內皮細胞，巨噬細胞，單核細胞都具有此功能；2）過度金屬離子介導的LDL氧化修飾，如Ca2+，Fe2+等；還有其他形式的氧化修飾，包括物理方法如紫外線，或過氧化物酶催化。

本品為紅色熒光標記的氧化型人源低密度脂蛋白（Human DiI-Ox-LDL），是標記熒光探針DiI（1,1-dioctadecyl-3,3,3,3- tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate）的Ox-LDL，可以標記血管內皮細胞和巨噬細胞，可用來鑒定并分選這些細胞，以及用來研究不同細胞系對修飾化LDL的內吞作用。我司提供的DiI-Ox-LDL，每個批次均經過牛大動脈內皮細胞和小鼠巨噬細胞的標記檢測來評估產品的標記特異性，從而保證結果的一致性。

濃度：0.8-3.0 mg/ml

外觀：乳狀液體

緩沖液組分（Buffer Components）：0.02 mM EDTA in PBS, pH 7.4
儲存條件：4℃，無菌避光，有效期6周
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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