產(chǎn)品目錄

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
冰凍切片快速抗原修復(fù)液	Quick Antigen Retrieval Solution for Frozen Sections	100mL	CS-01F98063

細(xì)胞或組織用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后，會導(dǎo)致蛋白之間的交聯(lián)(cross-link)，從而遮蔽樣品的抗原位點(diǎn)，導(dǎo)致免疫染色時染色信號減弱，甚至出現(xiàn)一些假陽性染色結(jié)果。

本抗原修復(fù)液含有了廣泛使用的SDS等抗原修復(fù)試劑等，pH值約為7.4，可以快速有效地去除醛類固定試劑導(dǎo)致的蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露石蠟切片等樣品中的抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

冰凍切片快速抗原修復(fù)液是一種特別適合用于冰凍切片的快速抗原修復(fù)液，只需室溫孵育5分鐘即可完成對冰凍切片樣品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定后的抗原修復(fù)。本產(chǎn)品特別適合用于冰凍切片的抗原修復(fù)并用于后續(xù)的免疫染色。

通常石蠟切片都需進(jìn)行抗原修復(fù)處理，而冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)處理。抗原修復(fù)會大大改善石蠟切片的免疫染色效果，但對于冰凍切片的染色效果很多文獻(xiàn)資料表明也有顯著改善。特別是當(dāng)冰凍切片免疫染色效果欠佳時，可以考慮嘗試進(jìn)行抗原修復(fù)。從原理上來看，無論冰凍切片還是細(xì)胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛類試劑固定的樣品，進(jìn)行抗原修復(fù)都會有效去除蛋白之間的交聯(lián)，充分暴露抗原表位，從而大大改善免疫染色效果。

保存：2～8℃，有效期一年。

規(guī)格說明：

一個包裝的本產(chǎn)品可以配制成500毫升抗原修復(fù)液(1X)。按照每個片子需要10毫升抗原修復(fù)液(1X)計(jì)算，一個包裝的本產(chǎn)品可以用于50個樣品。按照每個片子需要5毫升抗原修復(fù)液(1X)計(jì)算，則一個包裝的本產(chǎn)品可以用于100個樣品。

注意事項(xiàng)：

抗原修復(fù)過程可以使用染色缸和染色架或郵寄夾進(jìn)行操作。塑料染色缸、染色架和郵寄夾可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免驟冷驟熱導(dǎo)致的玻璃破碎。
本抗原修復(fù)液使用前必須先充分溶解并混勻，然后用重蒸水或MilliQ水稀釋5倍，配制成抗原修復(fù)液(1X)。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量

(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。

c．細(xì)胞懸液離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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