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產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	規(guī)格	貨號
小分子蛋白電泳試劑盒	Small molecule protein electrophoresis Kit	10次	CS-01F98047

本試劑盒含有小分子蛋白電泳(多肽電泳)全套試劑，可以用來檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規(guī)大小的PAGE膠(8×10cm)。

試劑盒特點：

1 適用范圍廣：2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS，適用于多肽的變性和非變性電泳。

2 分辨率高：凝膠緩沖液獨特配方，可以有效分離1-5kD多肽。

3 穩(wěn)定性高：凝膠緩沖液pH為中性，存放時間長。

4 使用方便：配制凝膠時只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝膠。

使用方法：

1、將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適)，條帶1-2分鐘即可見。

2、搖床上常溫搖動10-15分鐘。

3、觀察結果。

注意事項：

1、使用方法中的各種參數(shù)僅針對面積8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝膠，如果使用更大面積或更厚的凝膠，請加入更多的染色液并延長染色的時間。

2、常規(guī)染色所需的漂洗，固定，脫色步驟都無必要。

3、本染色液可以重復利用1-2次，敏感性會有輕微下降，請延長染色時間。

4、本染色液有輕微腐蝕性，請帶手套操作。使用后，請蓋好瓶蓋，常溫密封保存。
儲存條件：4℃，有效期一年。

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養(yǎng)細胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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