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本產品為Protein G與Sepharose偶聯后產物，可從血清，腹水，細胞培養上清和細胞抽提物中分離和純化多種哺乳動物丌同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。Protein G是鏈球菌(group C和G)細胞表面蛋白。它不Protein A類似，通過不免疫球蛋白的Fc區相互作用，可結合大多數哺乳動物的IgG。但兩者結合特異性有所丌同。Protein G對人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a等具有高親和力。天然Protein G具有白蛋白和細胞表面結合域。重組Protein G去除了白蛋白和細胞表面結合域，以減少非特異性結合。本產品具有廣譜 IgG結合、高Fc段結合活性、高抗體吸附量和性能穩定等特點，可重復多次使用。

注意事項：

1、凝膠從冷室或冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復到室溫后裝柱，避免產生氣泡影響柱效。

2、裝柱時盡可能維持凝膠長徑比為5:3-2:1，長徑比過大將導致洗脫峰拖尾，洗脫體積增大；長徑比過小將導致樣品與填料接觸時間短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。

3、若上樣液中抗體濃度過高，應使用平衡緩沖液稀釋至1-2 mg/ml，以免上樣濃度過高影響柱效。

4、可以采用降低上樣時的流速來增加樣品與填料接觸時間從而提高純化抗體量。

5、凝膠用低pH緩沖液洗脫時間應盡可能短，洗脫后用中性緩沖液盡快中和至pH中性，以延長親和介質的使用壽命。

6、洗脫后，應立刻用如中和緩沖液將收集到的抗體溶液中和到中性(pH7.4左右)，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

7、填料使用后應用0.1 M檸檬酸鈉緩沖液(pH3.0)做再生處理，長期采用的洗脫條件將縮短親和介質的使用壽命。
儲存條件：2～8℃，避免冷凍

實驗步驟：

(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量

(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)

操作步驟:

1. 勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。

b.單層培養細胞直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。

c．細胞懸液離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研

2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。

3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。

6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。

7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。

8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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