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SDS-PAGE快速電泳液

  • 產品貨號：CS-01F97999
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：167
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：500ml
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：SDS-PAGE快速電泳液現貨供應，價格實惠。

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標簽:SDS-PAGE快速電泳液 500ml 

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規格

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SDS-PAGE快速電泳液

Fast SDS-PAGE Running Buffer(10×)

500ml

CS-01F97999

SDS-PAGE是蛋白質科學研究中為常用的技術之一，使用常規SDS-PAGE電泳緩沖液(TG，Tris-Glycin系統)進行電泳時，電泳所需的時間一般為90分鐘左右(mini膠)，應用本產品可使同樣的mini膠的SDS-PAGE所需的電泳時間縮短至20-30min，同時電泳后的條帶較使用常規的TG電泳緩沖液所跑出的條帶分辨率提高且更加清晰。本產品的使用非常簡單，只需將您使用的常規TG電泳緩沖液系統更換為本產品的稀釋液，調整電壓后進行電泳即可，無需添加任何實驗步驟。同時稀釋為工作液的本產品可重復使用4-5次。本產品既可節省您寶貴的時間也可降低您的實驗成本。

注意事項：

1、操作時請務必佩戴手套，如濺到皮膚上，請立即用大量水沖洗。

2、本產品中含有SDS，適合變性凝膠電泳，不適合非變性凝膠電泳。

3、應用本產品所進行的SDS-PAGE的結果顯示，本產品的應用會使蛋白的分辨范圍發生變化，同等濃度的凝膠，其分辨的低分子量要小于使用TG電泳緩沖液(見下表)。

操作步驟：(以Bio-Rad mini膠及相關配套設備為例)

1、本產品為10倍濃縮液，使用時用純水10倍稀釋后配制成工作液(例如：取100ml本產品后用純水定容至1 L)。

2、將適量的本產品加入到電泳槽的內、外槽中，調整電源為恒壓200-250 V進行電泳。電泳指示劑溴酚藍至凝膠底部，所需時間約20-30 min。

3、電泳完成后收集電泳槽內、外槽電泳液，4℃保存，可重復使用4-5次，但如發生渾濁請勿使用。
儲存條件：室溫
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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