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細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F97950
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 庫存：100
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  • 含量：100次
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒 100次 

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細胞膜蛋白與細胞漿蛋白提取試劑盒

Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit

100次

CS-01F97950

本試劑盒提供了一種比較簡單、方便地從培養細胞或組織中抽提細胞膜蛋白和細胞漿蛋白的方法。抽提的膜蛋白不僅包括質膜上的膜蛋白，也包括線粒體膜、內質網膜和高爾基體膜等上的膜蛋白。

英文名稱：Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit

產品規格：100次

本試劑盒通過勻漿適度破碎細胞，經低速離心去除細胞核和少數未破碎的細胞產生的沉淀，隨后取上清高速離心獲得細胞膜沉淀和含有細胞漿蛋白的上清，然后通過優化的膜蛋白抽提試劑從沉淀中抽提獲取膜蛋白。約90分鐘即可完成培養細胞或組織的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白的分離和抽提。抽提得到的蛋白可以用于SDS-PAGE，Western、酶活性測定等后續實驗。

膜蛋白抽提試劑中含有蛋白酶抑制劑、磷酸酯酶抑制劑和EDTA等，后續不適合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受這些抑制劑影響的酶的活性測定，但抽提獲得的膜蛋白或細胞漿蛋白適合用于檢測蛋白的磷酸化水平。本試劑盒按照本說明書的操作步驟可以抽提100個細胞或組織樣品。

試劑盒組分：

膜蛋白抽提試劑A————100ml

膜蛋白抽提試劑B————30ml

注意事項

1. 需自備PMSF。PMSF一定要在抽提試劑加入到樣品中前2-3分鐘內加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(YT615)可以向訂購。

2. 使用本試劑盒抽提到的細胞膜蛋白與細胞漿蛋白均可直接用的BCA法蛋白濃度測定試劑盒(YT036、YT037)測定蛋白濃度。抽提獲得的細胞膜蛋白不適合用Bradford法測定蛋白濃度。
儲存條件：-20℃，有效期一年。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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