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動物細胞裂解液A(非變性)

  • 產品貨號：CS-01F97920
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：210
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：100mL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：動物細胞裂解液A(非變性)現貨供應，價格實惠。

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標簽:動物細胞裂解液A(非變性) 100mL 

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產品名稱

英文名稱

規格

貨號

動物細胞裂解液A(非變性)

Animal Cell Lysis Solution(A)

100mL

CS-01F97920

英文名稱：Animal Cell Lysis Solution(A)

產品規格：100mL

本產品含有多種細胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非變性或變性條件下迅速裂解組織或培養細胞，使之釋放出細胞內蛋白，用于后續實驗。

產品特點：

1.快速裂解，多種裂解成分經過精心優化，能快速使細胞裂解。

2. 非變性(BTN80807A)產品能大程度地保留蛋白天然結構和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，還可以用于蛋白活性檢測(信號傳遞研究和酶動力學檢測)和Western Blot等各種后續實驗。

3.變性(BTN80807B)裂解細胞的效率更高，主要用于對抗原空間構型不敏感的免疫共沉淀實驗，還可以用于Western Blotting。

4.適用于培養細胞(包括懸浮細胞)和新鮮組織。

儲存條件：常溫運輸、4℃保存，有效期一年。

注意事項：

1. 如果在本產品中額外再加入終濃度為1×的、新鮮配制的蛋白酶抑制劑復合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。

2. 如果用于信號傳遞研究，好在本產品中加入終濃度為1×的、新鮮配制的磷酸酶抑制劑復合物。

3. 整個裂解步驟都要在冰浴或4℃操作。本產品和PBS 均需預先冷卻。
4. 本產品所含有較高濃度的去垢劑會對Bradford蛋白濃度測定有較大影響，因此只能使用BCA法測定蛋白濃度。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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