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LP8000轉染試劑

  • 產品貨號：CS-01F97814
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：0.5mL|1.5mL|5×1.5mL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：LP8000轉染試劑現貨供應，價格實惠。

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標簽:LP8000轉染試劑 0 5mL 1 5mL 

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LP8000轉染試劑

LP8000 Transfection Reagent

0.5mL|1.5mL|5×1.5mL

CS-01F97814

本制品是一種以納米材料為基礎的便捷的高效細胞轉染試劑，達到甚至過了國際主流轉染試劑的轉染效果，并且轉染過程無須任何孵育時間，實現了細胞轉染的至簡操作。適用于把質粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白復合物或帶負電荷的蛋白轉染到真核細胞中，也可以用于活體動物的核酸轉染以及用于基因治療。

LP8000轉染試劑的納米技術可保證其瞬時轉染和穩定轉染時的可靠性和穩定性。

LP8000轉染試劑使用特別便捷，無血清培養液和核酸及轉染試劑可以直接混勻，質粒轉染無需任何孵育時間，即可直接加入到細胞培養器皿內，實現了細胞轉染的至簡操作。

LP8000轉染試劑對于常見的哺乳動物細胞具有非常高的轉染效率、重復性好、操作簡單、通常觀察不到細胞毒性，對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用，特別適用于難轉染的貼壁細胞。LP8000轉染試劑由于幾乎完全沒有細胞毒性，從而在轉染后無需進行細胞培養液的更換，在轉染24-48小時后直接收集細胞進行蛋白表達鑒定即可。

LP8000轉染試劑經過對小鼠胚胎成纖維細胞NIH3T3、人胚胎腎細胞HEK293/HEK293T、宮頸癌細胞Hela、結腸癌細胞HCT116、肝細胞HepG2和肺癌細胞A549等多種細胞的測試，轉染效率和Thermo公司的Lipofectamine 3000 Transfection Reagent、Promega公司的ViaFect Transfection Reagent相當，在一些細胞中甚至比Lipofectamine 3000和ViaFect的轉染效率更高。

LP8000轉染試劑不僅適用于質粒、siRNA等單一成分的細胞轉染，也適合多個質粒或者質粒與siRNA等的組合轉染。

LP8000轉染試劑轉染過表達質粒后，通常24-48小時后達到較高的蛋白表達水平，并且很多情況下蛋白表達量在轉染后48小時顯著高于轉染后24小時；轉染siRNA通常3-5天后對于目的基因的下調水平會比較理想。

LP8000轉染試劑轉染細胞時，不受培養液中的血清和抗生素的影響，即可以在血清和抗生素存在的情況下進行細胞轉染。
LP8000轉染試劑的轉染效果可以通過轉染表達EGFP等熒光蛋白的質粒進行快速鑒定。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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