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SARS-CoV-2 N蛋白基因質粒

  • 產品貨號：CS-01F97813
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • 含量：1μg|100μg
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：SARS-CoV-2 N蛋白基因質粒現貨供應，價格實惠。

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標簽:SARS-CoV-2 N蛋白基因質粒 1μg 100μg 

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SARS-CoV-2 N蛋白基因質粒

SARS-CoV-2 N gene plasmid

1μg|100μg

CS-01F97813

SARS-CoV-2 N基因質粒是我公司推出的哺乳動物細胞表達質粒，用于表達C端帶有Myc標簽(EQKLISEEDL)的SARS-CoV-2核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein)，可以使用抗Myc標簽的抗體來識別N蛋白的表達，或進行免疫共沉淀分析等。該質粒含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達，質粒為氨芐青抗性。

N蛋白是冠狀病毒的四個結構蛋白之一，由N基因編碼，為核衣殼磷酸蛋白，是冠狀病毒的主要結構蛋白，也是冠狀病毒編碼蛋白中表達豐度高的蛋白。N蛋白在病毒的組裝、釋放以及病毒的致病性方面發揮重要作用。冠狀病毒N蛋白功能相對保守，包含兩個結構獨立的RNA結合結構域：N端RNA結合結構域(N-terminal RNA binding domain，NTD)和C端結構域(CTD)，中間還有一個絲和精富集的連接區(SR linker)。冠狀病毒的N蛋白能與病毒RNA緊密結合，通過螺旋堆積將RNA包裝，從而保護病毒的基因組RNA。在病毒感染過程中，N蛋白是所有結構蛋白中誘導免疫反應烈的蛋白，由于其分子量小，沒有糖基化修飾，易于蛋白表達純化，因此常作為冠狀病毒血清學檢查為合適的抗原。

使用說明：

1．使用1μg包裝的本產品時，請先取少量本質粒轉化大腸桿菌，進行質粒小量、中量或大量抽提后再用于后續用途。抽提獲得的質粒可以通過酶切電泳進行鑒定，或通過測序進行鑒定。
2．100μg包裝的本產品質粒濃度為0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者轉染細胞。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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