世俱杯2025赛程_中国足彩网首页官网_埃弗顿vs托特纳姆热刺_中国女排现状 - 奥运女足历届冠军一览表

  • 13585831301
  • 021-59541103 021-60443211
  • 3004967995

NMY51酵母感受態細胞

  • 產品貨號：CS-01F97777
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：212
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：10×100μl|50×100μl
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：NMY51酵母感受態細胞現貨供應，價格實惠。

在線訂購  免費訂購熱線：021-59541103 021-60443211

標簽:NMY51酵母感受態細胞 10×100μl 50×100μl 

產品目錄

聯系我們

聯系人:高小姐

電話:021-59541103 021-60443211

手機:13585831301

Q Q： 3004967995

Email:3004967995@qq.com

詳細地址：上海嘉定區嘉羅公路1661

商品詳情購物流程代測服務付款方式常見問題

產品屬性： 

產品名稱

英文名稱

規格

貨號

NMY51酵母感受態細胞

NMY51 Chemically Competent Cell

10×100μl|50×100μl

CS-01F97777

DUALmembrane系統是專門篩選跨膜蛋白間相互作用的檢測技術，它利用分離的泛素系統(split-ubiquitin)直接檢測天然狀態下膜蛋白間的相互作用，是目前市面上檢測膜蛋白間相互作用的酵母雙雜系統。

此系統采用NMY51酵母菌株，可直接轉化質粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗；此菌株Transformation marker為：trp1，leu2-3，報告基因為：HIS3，ADE2和lacZ，步通過營養缺陷型報告基因(HIS3，ADE2)進行選擇性生長篩選，進一步通過LacZ報告基因進行β-半乳糖分析顯色的定量或半定量篩選，三個獨立的報告基因，受不同啟動子的調控，降低假陽性幾率。

原理：泛素(ubiquitin)分子量很小，由76aa 殘基組成；泛素作為降解信號分子，可以連接另外一種蛋白質的N端，然后被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別，從而導致與泛素相連的蛋白被酶解。

泛素可以人為分成兩部分：N端(Nub)，C端(Cub)。先，人為地將泛素Nub的3位異亮突變為甘(NubI突變為NubG)。這樣與Cub的親合力大大降低，避免了Cub和Nub自我結合或接近的可能性。其次，將Cub部分與人工合成的LexA-VP16轉錄激活因子融合成一個融合蛋白Cub-LexA-VP16。

正常條件下NubG不與Cub結合，UBPs也不能識別分離的泛素，轉錄激活因子也不會被切下來。后，將要檢測的蛋白質分別與NubG和Cub融合，形成bait融合蛋(bait-cub-LexA-VP16)和prey融合蛋白(prey-NubG)。

如果bait和prey發生相互作用，就會促使NubG和Cub的相互接近，被 UBPs識別，導致LexA-VP16的解離，進入核內，從而激活報告基因的轉錄。

注意事項：

1.感受態細胞好在冰上融化。

2.轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

3.同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4.NMY51酵母菌株對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。
5　酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48h培養可見直徑1mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60h培養可見直徑1mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80h培養可見直徑1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養可見直徑1mm克隆。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

在線咨詢

留言注意事項：

1.遵守中華人民共和國有關法律、法規，尊重網上道德，承擔一切因您的行為而直接或間接引起的法律責任。

2.請您真實的反映產品的情況,不要捏造、誣蔑、造謠。如對產品有任何疑問,也可以留言咨詢。

3.未經本站同意，任何人不得利用本留言簿發布個人或團體的具有廣告性質的信息或類似言論。

    您感興趣的產品*
    您的單位*
    聯系人*
    聯系電話*
    詳細地址*
    常用郵箱*
    請輸入您對我們的意見或建議*
    驗證碼*

同類產品

訂購流程

訂貨流程

產品訂購說明:

  

1、報價含普票、運費。

 

2、常用試劑備貨充足，除對溫度要求極其嚴格的產品當天可發貨。

  

3、進口原裝產品要3-6周的貨期，詳細情況請咨詢客服。

  

4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

5、如需代為檢測，標本對環境溫度高，可聯系客服安排專人取樣（限省內客戶）。

  

6、代測免收代測費，一周出結果。

7、產品因運輸途中包裝破損請拒絕簽收，做退回。我們將在24小時之內為您補發 損壞產品。

8、如因單位財務制度原因，可申請先發貨，報賬后付款（此條款僅限醫院、學校信譽良好客戶）。

付款方式

普票匯款信息

  

賬 戶 名：上海生物

 

開 戶 行：中國銀行山東省分行營業部

  

賬 號：2169 2341 6278

 為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個銀行的賬戶，學校、醫院客戶購買產品如因單位財務制度原因可先發貨待報賬后匯款，請及時告知銷售人員已做具體操作。