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JM109感受態細胞

  • 產品貨號：CS-01F97755
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：192
  • 庫存：100
  • CAS號：
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  • 含量：10×100μl|20×100μl
  • 品牌名稱:莼試
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  • 分子量：

簡介內容：JM109感受態細胞現貨供應，價格實惠。

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標簽:JM109感受態細胞 10×100μl 20×100μl 

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JM109感受態細胞

E.coli JM109 Competent Cells

10×100μl|20×100μl

CS-01F97755

本公司生產的JM109感受態細胞是采用大腸桿菌JM109菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。

基因型：recA supE44 endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特 點：一種琥珀抑制型F’重組缺陷菌株。支持M13噬菌體載體的生長，對轉染的DNA有修飾作用，但無限制作用。該菌株中的F’帶有lacZΔM15，后者使得與在λZAP中編碼的β-半乳糖苷酶氨基端進行α-互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下各步驟均為無菌操作）

1、將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以100μl感受態細胞為例。

2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要過感受態細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養基，37℃ 180rpm振蕩培養1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養12-16小時。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100μl左右轉化產物涂板；反之，如果轉化的DNA總量較少，可取200～300μl的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、收到感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量

5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失將到低。
儲存條件：-70℃保存，必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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