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鼠尾直接PCR擴增試劑盒

  • 產(chǎn)品貨號：CS-01F97487
  • 產(chǎn)品價格：電議
  • 產(chǎn)品產(chǎn)地：國產(chǎn)
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：251
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：100T|500T
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內(nèi)容：鼠尾直接PCR擴增試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，價格實惠。

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標簽:鼠尾直接PCR擴增試劑盒 100T 500T 

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規(guī)格

貨號

鼠尾直接PCR擴增試劑盒

Mouse Tail Direct PCR Kit

100T|500T

CS-01F97487

本試劑盒采用獨特的裂解緩沖液快速裂解鼠尾，釋放的DNA無需純化便可以作為模板，用高度耐抑制物的2×DirectAmp PCR Mix擴增，擴增產(chǎn)物可直接上樣電泳。具有簡單，高通量篩選等特點，一般擴增大小<2.5kb。

適用范圍：鼠尾、動物組織（哺乳動物，海洋動物，昆蟲等）、細胞等。

保存條件：2×DirectAmp PCR Mix -20℃保存，避免反復(fù)凍融次數(shù)過多，3周內(nèi)短時間使用可放4℃保存。其余常溫或者4℃保存，有效期12個月。

操作步驟：

1．配制即用裂解液：按照10μl Buffer AD1 + 90μl ddH2O = 100μl比例混合配制成即用裂解液。每個樣品需要75μl即用裂解液，具體量可以根據(jù)樣品數(shù)量按照比例放大配制即可。即用裂解液可常溫存放1個月。

2．取75μl裂解液于0.2mL PCR薄壁管中（沒有PCR儀器者也可以用0.5ml離心管）。然后加入1-2mm的鼠尾或者2mm見方的組織（切記不可多加，多加反而抑制下游PCR），樣品浸沒在裂解液內(nèi)。

3．98℃裂解30min（建議PCR儀上操作），根據(jù)情況裂解時間可以在10分鐘-1小時內(nèi)調(diào)整。

4．取出離心管迅速放冰上，加入75μl Buffer AD2，混勻，即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
5．PCR擴增：
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產(chǎn)品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術(shù)有限公司

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