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BalbExcel UltraSYBR Master預混液

  • 產品貨號：CS-01F97389
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • CAS號：
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  • 含量：1mL|5mL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：BalbExcel UltraSYBR Master預混液現(xiàn)貨供應，價格實惠。

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標簽:BalbExcel UltraSYBR Master預混液 1mL 5mL 

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BalbExcel UltraSYBR Master預混液

BalbExcel UltraSYBR Mixture

1mL|5mL

CS-01F97389

儲存條件：冷凍（-20℃）避光

概述

BalbExcel UltraSYBR Mixture是專用于染料法（SYBR GreenⅠ）實時熒光定量PCR的預混體系，濃度為2×，包含GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I熒光染料和Mg2+，操作簡單方便。主要用于基因組DNA靶序列和RNA反轉錄后cDNA靶序列的檢測。

特點

所含的熒光染料SYBR Green I可以與所有的雙鏈DNA結合，使該產品可用于不同靶序列的檢測而不需合成特異性標記探針；

含有的GoldStar Taq DNA Polymerase是一種經化學修飾的、全新高效熱啟動酶，在常溫下沒有聚合酶活性，有效避免在常溫條件下由引物和模板非特異性結合或引物二聚體而產生的非特異性擴增，酶的激活須在95℃下孵育3分鐘；

獨特的PCR緩沖體系與熱啟動酶的組合，有效抑制了非特異性的PCR擴增，顯著提高了PCR的擴增效率；

該產品應用范圍廣，適用于無需ROX作為校正染料的所有熒光定量PCR儀。

該產品靈敏度高，精確定量低拷貝的模板。使用本產品可以得到更廣的線性范圍，對目的基因定量更準確。

應用
基因表達分析、拷貝數(shù)分析
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。

原創(chuàng)作者：上海莼試生物技術有限公司

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