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lncRNA熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green)

  • 產品貨號：CS-01F97361
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：277
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20μl×125次|20μl×500次
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式：
  • 分子量：

簡介內容：lncRNA熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green)現貨供應，價格實惠。

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標簽:lncRNA熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green) 20μl×125次 20μl×500次 

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產品屬性： 

產品名稱

英文名稱

規格

貨號

lncRNA熒光定量PCR試劑盒（SYBR Green)

lnRsmart lncRNA qPCR kit

20μl×125次|20μl×500次

CS-01F97361

介紹

本試劑盒基于SYBR Green I嵌合熒光法的原理，可對目標lncRNA進行快速、特異性的定量檢測。與mRNA相比，lncRNA具有豐度低、GC含量差異大、二級結構更復雜等特性，傳統定量試劑對lncRNA難以達到理想的效果。 

本試劑盒中的2×lnRsmart lncRNA PreMix是專門為lncRNA定量檢測而研發的新一代預混形式的熒光定量PCR檢測試劑，其中的DNA聚合酶采用的是抗體修飾的熱啟動形式，配合特殊優化的Buffer體系，可確保本試劑盒在保證較高的反應特異性的情況下具有更高的檢測靈敏度。此外，Buffer中添加了的H-competitor因子和EP組分，使得本試劑盒具有廣泛的樣本普適性，對不同GC含量的模板、具有復雜高級結構的模板、PCR抑制劑殘留較多的模板以及長片段模板等具有非常好的擴增適用性，特別適合高級結構相對復雜，整體豐度相對較低的lncRNA的定量檢測。此外，優化的預混液可縮短Real-Time PCR的反應時間，適用于標準或快速定量的PCR反應。

產品特點：

操作簡便：2×lnRsmart lncRNA PreMix中預混有SYBR Green I，PCR反應液配制時，只需加入模板、引物、滅菌蒸餾水便可進行快速Real-Time PCR反應，操作簡單方便。

普適性好：本試劑盒中特別添加了H-Competitor因子，能夠競爭氫鍵、增雙鏈的打開度，使本產品具有廣泛的樣本普適性，對具有復雜高級結構的模板和長片段擴增等具有非常好的適用性。

性能：本試劑盒特制的快速PCR Buffer體系含有獨特的PCR穩定因子——EP，能夠有效的保護酶活，抵御各種PCR抑制劑的干擾，保證了2×lnRsmart lncRNA PreMix具有高擴增效率、高擴增特異性、高擴增靈敏度和寬廣的可信范圍的特點。

定量準確：本試劑盒附帶ROX Reference Dye，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差，方便客戶針對不同型號熒光定量PCR儀時選擇對應濃度使用。
穩定性好：2×lnRsmart lncRNA PreMix采用無色透明管包裝，經檢測，光照不會影響體系的定量的結果。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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