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5×qPCR MasterMix(探針法,含UDG酶)

  • 產品貨號：CS-01F97303
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：255
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：20μl×100T|20μl×500T
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：5×qPCR MasterMix(探針法,含UDG酶)現貨供應，價格實惠。

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標簽:5×qPCR MasterMix(探針法 含UDG酶) 20μl×100T 20μl×500T 

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產品屬性： 

產品名稱

英文名稱

規格

貨號

5×qPCR MasterMix(探針法,含UDG酶)

5×Probe qPCR MasterMix (UDG)

20μl×100T|20μl×500T

CS-01F97303

本制品將化學修飾的熱啟動Taq DNA聚合酶、UNG酶、反應Buffer、dUTP/NTP Mixture等試劑預混在一起，是一種5×濃度的單組分預混試劑，進行實驗時，PCR反應液的配制十分方便簡單，只需加入引物、探針、模板、水即可。

本制品中的DNA聚合酶為化學法修飾的Hot Start Taq DNA聚合酶，該酶在50℃以下100%無活性，只有95℃條件下加熱15min后才能完全恢復酶的活力。因此該系統可以有效抑制非特異性PCR擴增，極大的提高了PCR擴增特異性。該試劑盒獨特的反應緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴增結果、檢測靈敏度更高、信號更。該制品配有單獨的ROX內參染料，使得該試劑可應用于所有RealTime PCR機型。

由于PCR對核酸的擴增效率極高，在診斷PCR實驗中，非常容易造成移液器、臺面、PCR儀、空氣等氣溶膠污染。當實驗環境被污染后，會導致陰性樣本的假陽性結果。本TaqMan探針法定量試劑中，將dNTP中的dTTP全部更換為dUTP，從而使得擴增后的PCR產物中包含dU堿基。在隨后的實驗中，含有氣溶膠污染的dU PCR產物，將被本試劑中的UNG糖基化酶降解，從而去除了氣溶膠的污染效應，本試劑中的UNG酶在37度孵育2分鐘，即可消除高達10萬個Copy的核酸污染物。因此，本制品是診斷定量PCR檢測的佳試劑。

保存條件：-20℃，有效期2年。長期-20℃保存可能會出現沉淀，室溫融化后混合均勻，不影響試劑性能。經常使用，融化后可置于4℃，可保存1年

產品特點：

熱啟動酶采用化學修飾，100%熱啟動

引入UNG，可高效消除氣溶膠污染

單組份預混液，使用方便快捷

高特異性，有效抑制非特異性擴增

高靈敏度，可檢測低豐度基因
適用于所有實時定量PCR儀器
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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