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兩步法RT-PCR試劑盒

  • 產品貨號：CS-01F97203
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度：181
  • 庫存：100
  • CAS號：
  • 方法：
  • 含量：50次RT+200次PCR
  • 品牌名稱:莼試
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  • 分子量：

簡介內容：兩步法RT-PCR試劑盒現貨供應，價格實惠。

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標簽:兩步法RT-PCR試劑盒 50次RT+200次PCR 

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兩步法RT-PCR試劑盒

BalbScript Two-Step RT-PCR Kit

50次RT+200次PCR

CS-01F97203

本試劑盒基于本公司BalbScript反轉錄酶和HotStart Taq DNA聚合酶，具有高效合成能力和高擴增效率。該試劑盒能以動物、植物和微生物的總RNA或mRNA為模板，用2×BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix進行反轉錄，然后用2×HotStart Taq Master Mix進行擴增。本試劑盒含有從RNA到cDNA，以cDNA為模板進行擴增的全部試劑。

產品特點：

操作簡單：操作步驟少，降低污染。

特異性高：使用HotStart Taq酶進行擴增，減少非特異性反應。

儲存條件：-20℃

注意事項：

本試劑盒進行PCR擴增時延伸時間為1kb/min，客戶可根據具體片段長度進行延伸時間的調整。

如果同時操作多個樣品，建議先在冰上先配制預混液，然后再分裝到各個反應管中，加入模板啟動反應。

反應擴增時出現目標條帶拖帶，系模板濃度過高或特異引物濃度不適等原因所致，可對模板及引物濃度等進行調整；反應出現雜帶，可對退火溫度進行調整，或重新設計特異性高的引物。
為了保證反應的正常進行，需使用高質量的RNA模板。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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1、報價含普票、運費。

 

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4、訂貨時間為工作日每周一至周五16:00之前。

  

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