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FastStar熱啟動DNA聚合酶

  • 產品貨號：CS-01F97113
  • 產品價格：電議
  • 產品產地：國產
  • 包裝類型:盒裝
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  • CAS號：
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  • 含量：500U|2500U
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容：FastStar熱啟動DNA聚合酶現貨供應，價格實惠。

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標簽:FastStar熱啟動DNA聚合酶 500U 2500U 

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FastStar熱啟動DNA聚合酶

HotStar DNA Polymerase

500U|2500U

CS-01F97113

HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶單克隆抗體和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品，適用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗體進行PCR擴增時，高溫變性前由于Taq酶抗體與Taq酶結合抑制DNA聚合酶活性，能夠在低溫條件下有效抑制引物的非特異性退火及引物二聚體引起的非特異性擴增。Taq酶抗體在PCR反應初的DNA變性步驟中變性，DNA聚合酶活性恢復，達到熱啟動效果。使用本品無需特殊地對Taq酶抗體失活處理，可以在常規PCR反應條件下使用。

HotStar DNA Polymerase具有5'→3'DNA聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，無3'→5'外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以擴增長度達5 kb的片段。擴增得到的PCR產物3'端附有一個“A”堿基，因此可直接用于T/A克隆。本產品具有延伸速度快、擴增效率高的特點，主要適用于PCR法擴增DNA片段、DNA序列測定等實驗。

注意：

1)一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度Tm低5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度。

2)延伸時間應根據所擴增片段大小設定。

3)可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以在保證產物得率的前提下應盡量減少循環次數。
儲存條件：-20℃，避免反復凍融。
實驗步驟：
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻  
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定，不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。產品僅用于科研
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復合物完全分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質，脂肪，多糖或胞外物質（肌肉，植物結節部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中，如要分離DNA和蛋白質可保留有機相，進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

原創作者：上海莼試生物技術有限公司

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